發(fā)布時(shí)間：2017-07-18 01:28

  本文關(guān)鍵詞：哺乳動物細(xì)胞中EB病毒誘導(dǎo)基因3的定位及表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建帶有FLAG-tag的人野生型EB病毒誘導(dǎo)基因3(EBI3)真核表達(dá)載體,用其轉(zhuǎn)染COS-7和HEK 293T細(xì)胞,觀察EBI3在哺乳動物細(xì)胞中的定位和表達(dá)情況。方法設(shè)計(jì)帶有FLAG-tag的引物,以含人EBI3全長cDNA序列的質(zhì)粒為模板,以PCR方法擴(kuò)增出EBI3全長序列,然后插入真核表達(dá)載體pCDNA3.1中,構(gòu)建pCDNA3.1-EBI3-FLAG質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至COS-7細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察其在胞內(nèi)的定位情況;轉(zhuǎn)染至HEK 293T細(xì)胞,提取細(xì)胞總蛋白進(jìn)行Western blot。結(jié)果正確構(gòu)建pCDNA3.1-EBI3-FLAG質(zhì)粒;熒光定位實(shí)驗(yàn)表明在COS-7細(xì)胞中,EBI3蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,且較集中分布于靠近核膜的位置。Western blot結(jié)果表明該質(zhì)粒能在細(xì)胞中有效表達(dá)。結(jié)論 EBI3在COS-7細(xì)胞中有表達(dá),且主要分布在胞質(zhì)內(nèi),該研究結(jié)果為了解EBI3在細(xì)胞內(nèi)與其他蛋白質(zhì)相互作用及功能奠定了一定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)院生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： EBI 免疫熒光 細(xì)胞定位 轉(zhuǎn)染
【基金】：安徽省教育廳自然科學(xué)重點(diǎn)科研項(xiàng)目(編號:KJ2010A187) 安徽省自然科學(xué)基金(編號:11040606M170、11040606M164)
【分類號】：R392
【正文快照】： EB病毒誘導(dǎo)基因3(epstein-barr virus-inducedgene3,EBI3)蛋白最初是在受EB病毒感染的B淋巴細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)的,與白介素(IL)-12 p40亞基同源[1],是一種分泌型糖蛋白,屬于造血因子受體家族[2]。EBI3的基因定位于19p13.3,其cDNA全長650個(gè)堿基對,編碼含220個(gè)氨基酸的EBI3蛋白

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