本文關(guān)鍵詞：胚胎大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與C2C12肌管體外共培養(yǎng)體系的建立

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【摘要】：目的獲得胚胎大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與C2C12肌管共培養(yǎng)的條件,在體外建立穩(wěn)定的神經(jīng)-肌肉共培養(yǎng)體系,并形成功能性的神經(jīng)肌肉接頭。方法 C2C12成肌細(xì)胞株體外擴(kuò)增培養(yǎng)至60%~70%融合時(shí),用分化培養(yǎng)液誘導(dǎo)分化;取孕15~16d的SD大鼠,提取胚胎大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞,種植到分化5d的C2C12肌管細(xì)胞中,在神經(jīng)元基礎(chǔ)無(wú)血清培養(yǎng)液Neurobasal+2%B27中共培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察各個(gè)階段神經(jīng)元形態(tài)及突起長(zhǎng)度的變化、肌管形態(tài)變化及收縮特性、神經(jīng)肌肉接頭的形成,應(yīng)用免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)突觸后膜乙酰膽堿受體(acetylcholine receptor,AChR)特異性結(jié)合物α-銀環(huán)蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BTX),并采用屏幕錄像技術(shù)記錄共培養(yǎng)體系中肌肉收縮現(xiàn)象。結(jié)果在共培養(yǎng)體系中,原代脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與C2C12肌管細(xì)胞均能存活并進(jìn)一步分化成熟。3d時(shí),可見(jiàn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元伸出的軸突延伸至肌管膜表面或包繞肌管;1周時(shí),肌管按同一方向排列,出現(xiàn)廣泛的節(jié)律性收縮,同時(shí)免疫熒光染色結(jié)果顯示α-BTX特異性結(jié)合突觸后膜AChR;共培養(yǎng)10d后,運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元開(kāi)始凋亡,肌管細(xì)胞逐漸出現(xiàn)萎縮現(xiàn)象。結(jié)論在體外培養(yǎng)條件下,無(wú)需特殊培養(yǎng)基和各種營(yíng)養(yǎng)因子,運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和骨骼肌細(xì)胞即可共同生存、生長(zhǎng)并進(jìn)一步發(fā)育,建立突觸連接,觸發(fā)一系列神經(jīng)肌肉接頭信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),引發(fā)肌管節(jié)律性收縮。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科;
【關(guān)鍵詞】： 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元 成肌細(xì)胞 肌收縮 共同培養(yǎng)技術(shù) 神經(jīng)肌肉接頭
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81070775)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)可以更好地模仿體內(nèi)的環(huán)境,在體外建立適當(dāng)?shù)募?xì)胞共培養(yǎng)模型對(duì)于觀察多種細(xì)胞之間或兩種細(xì)胞之間的相互作用、了解細(xì)胞培養(yǎng)所需的條件及環(huán)境要求、探討藥物的作用機(jī)制和藥物可能作用的靶點(diǎn)、彌補(bǔ)單層細(xì)胞培養(yǎng)和整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的缺陷等眾多方面都有著重要意義[1]。

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 孫毅;趙冬梅;張燁;劉洪付;黃飛;;胎鼠前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的取材與培養(yǎng)研究[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年06期

2 陳永樂(lè);周光前;鄧宇斌;智偉;謝彗琪;鄧力;楊志明;王亞柱;;C2C12成肌細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為肌管的實(shí)驗(yàn)[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2008年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李偉;鄭蒙蒙;邱峰龍;朱才業(yè);韋光輝;王丹;李碧春;;山羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞系分離、培養(yǎng)及其成肌誘導(dǎo)分化研究[J];揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2013年01期

2 姜揚(yáng)揚(yáng);張恒柱;董倫;王曉東;嚴(yán)正村;;在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)背景下基因譜系重編技術(shù)的臨床應(yīng)用性研究[J];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志;2013年06期

3 張亞;王曉東;馮林;張婷;尹航;張錫慶;;大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年01期

4 周麗娜;王彥;李慶云;許華俊;藍(lán)孝斐;張秀娟;;骨骼肌C2C12細(xì)胞培養(yǎng)分化及肌纖維類型鑒定[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年10期

5 劉杰;傅強(qiáng);;馬血清在脂肪干細(xì)胞成肌誘導(dǎo)中的作用[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年14期

6 艾鶴英;秦建強(qiáng);余磊;廖華;;骨骼肌成肌干細(xì)胞體外三維與平面培養(yǎng)的比較研究[J];中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志;2010年02期

7 陳永樂(lè);周光前;鄧宇斌;智偉;謝彗琪;鄧力;楊志明;王亞柱;;C2C12成肌細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為肌管的實(shí)驗(yàn)[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2008年01期

8 袁曉峰;項(xiàng)鵬;李偉強(qiáng);胡曉俊;彭朝權(quán);;利用多位點(diǎn)Gateway技術(shù)構(gòu)建小鼠平滑肌肌動(dòng)蛋白α基因啟動(dòng)子慢病毒載體[J];中國(guó)組織工程研究;2012年27期

9 宋佳;曾纓;鄭民纓;張成;;肌肉特異性微小RNA和成肌調(diào)節(jié)因子在C2C12細(xì)胞成肌分化過(guò)程中的表達(dá)[J];中國(guó)組織工程研究;2012年32期

10 李偉;鄭蒙蒙;張亞妮;朱才業(yè);邱峰龍;韋光輝;李碧春;;過(guò)表達(dá)MyoD1基因山羊胎兒成纖維細(xì)胞系的建立及其成肌誘導(dǎo)分化[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年14期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 白雪;旋毛蟲(chóng)排泄分泌物調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞及成肌細(xì)胞功能的體外研究[D];吉林大學(xué);2011年

2 于淼瑛;重組四因子體外維持cESCs多能性和自我更新以及Lin28對(duì)cESCs染色質(zhì)重塑維持和細(xì)胞周期進(jìn)程的影響[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 王齊;三維骨骼肌組織體外構(gòu)建的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

2 艾鶴英;體外三維培養(yǎng)成肌干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

3 劉丹;CFL2基因干擾對(duì)成肌細(xì)胞C2C12肌球蛋白重鏈基因的影響及分子作用機(jī)制的初步探討[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2012年

4 程樹(shù)斌;器官型腦片培養(yǎng)OGD復(fù)氧模型中丁苯酞對(duì)于bcl-2/bax及bim蛋白的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

5 王龍;小鼠Dazl和Ddx4基因真核表達(dá)載體構(gòu)建和miR302/367簇誘導(dǎo)重編程的初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

6 王中霞;保元解毒湯含藥血清對(duì)TNF-α誘導(dǎo)成肌細(xì)胞萎縮模型的干預(yù)作用及作用機(jī)制研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2013年

7 李偉;山羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分離及成肌調(diào)節(jié)因子的克隆、表達(dá)與功能初探[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年

8 高穎娜;脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元—骨骼肌細(xì)胞共培養(yǎng)體系的建立[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 夏順漢,姚鑫,Ahmed MANSOURI,Peter GRUSS;Pax7基因在C 2C12細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及誘導(dǎo)失活(簡(jiǎn)報(bào))[J];實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào);1996年02期

2 趙合慶,楊曉玲,嚴(yán)志強(qiáng);胚胎大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的體外培養(yǎng)與鑒定[J];中華神經(jīng)科雜志;2004年05期

3 邱小忠;李小娜;陳維毅;余磊;廖華;焦培峰;賴桂華;歐陽(yáng)鈞;;周期性機(jī)械拉伸對(duì)C2C12成肌細(xì)胞增殖的影響[J];中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志;2006年02期

4 楊川;程樺;王川;嚴(yán)勵(lì);黎鋒;魏菁;;PDX-1對(duì)成肌細(xì)胞株C2C12分化為胰島素分泌細(xì)胞的作用[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2005年04期

5 楊川;李莉;王川;陳黎紅;黎峰;嚴(yán)勵(lì);程樺;;重構(gòu)腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)PDX-1對(duì)C2C12分化為胰島素分泌細(xì)胞的作用[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2006年05期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曲伸,何曉龍,王成海,路長(zhǎng)林;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在大鼠成肌細(xì)胞中表達(dá)及分泌[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1997年03期

2 陳曉萍,劉紅,吳燕,劉淑紅,吳海濤,范明;成人成肌細(xì)胞快速高效分離方法的建立[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2003年06期

3 楊志明,岑石強(qiáng),解慧琪,李勝富;原代人胚成肌細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖及分化特性[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2001年05期

4 王宏偉,楊曉青,包云,盧大儒,邱信芳,薛京倫;成肌細(xì)胞介導(dǎo)的hF Ⅸ蛋白在小鼠體內(nèi)的持續(xù)表達(dá)[J];中華血液學(xué)雜志;1997年09期

5 吳曙霞,崔玉芳;肌肉組織工程研究[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).生物醫(yī)學(xué)工程分冊(cè);2000年05期

6 張斌;黃富國(guó);;骨骼肌成肌細(xì)胞移植研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2006年08期

7 張盈帆;江華;林子豪;蔡在龍;吳包金;;聚集蛋白基因在原代培養(yǎng)成肌細(xì)胞中的表達(dá)[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年12期

8 王宏偉,李朝霞,包峗,盧大儒,邱信芳,薛京倫;人凝血因子ⅨcDNA在C2C12成肌細(xì)胞及C3H小鼠中的高效表達(dá)[J];中國(guó)科學(xué)C輯;1997年02期

9 何等旗;唐休發(fā);華成舸;馮楊;李小玉;;兩種不同來(lái)源成肌細(xì)胞存活率的比較研究[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

10 朱羽凡,曹承剛,王云,李鋼,史卉,萬(wàn)選才;抗運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元(Mn)抗體的產(chǎn)生及初步應(yīng)用(論著摘要)[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1992年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王寧遂;李朝霞;王宏偉;魯大儒;;人凝血因子IX基因在成肌細(xì)胞和C_3H小鼠中的表達(dá)[A];重慶市遺傳學(xué)會(huì)第一屆學(xué)術(shù)年會(huì)暨紀(jì)念孟德?tīng)栆?guī)律再發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2000年

2 吳海濤;陳曉萍;劉紅;劉淑紅;范明;;CNTF對(duì)在體和離體成肌細(xì)胞作用的比較[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第六屆應(yīng)用生理學(xué)委員會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

3 蘇冠華;劉啟云;盧永昕;孫雨霏;帥欣欣;劉曉明;;人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子慢病毒載體的構(gòu)建及其在成肌細(xì)胞中的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

4 張蕾;肖建英;許珂玉;李紅;;無(wú)啟動(dòng)子基因打靶載體的構(gòu)建及受體成肌細(xì)胞的制備[A];東北三省生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要[C];2008年

5 張勇;鄒仲敏;郭朝華;王勁;羅成基;程天民;;MyoD基因誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];第九屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

6 宋小飛;廖國(guó)龍;傅強(qiáng);徐月敏;;大鼠脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)成肌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

7 陳曉萍;劉紅;吳海濤;劉淑紅;吳燕;范明;;MAPK通路與CNTF對(duì)成肌細(xì)胞分化的負(fù)調(diào)控作用[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第六屆應(yīng)用生理學(xué)委員會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

8 王麗娜;姜錦鵬;倪迎冬;趙茹茜;;不同培養(yǎng)基對(duì)C2C12成肌細(xì)胞分化后生長(zhǎng)活力的影響[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2006年

9 楊爽;陽(yáng)菊華;紀(jì)曉輝;G Sabatakos;朱天慧;;δEF1抑制BMP-2誘導(dǎo)的成肌細(xì)胞C2C12向成骨細(xì)胞分化[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第七次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2003年

10 陳永君;汪萌芽;;離體脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的下行性控制及全麻藥異丙酚的影響[A];2005年中國(guó)神經(jīng)心理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 記者 田學(xué)科;科學(xué)家弄清肌肉發(fā)育中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 白毅;突觸形成的“陰陽(yáng)”調(diào)和機(jī)制被揭示[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

3 葛秋芳;美科學(xué)家培育出修理心臟的“導(dǎo)線”[N];新華每日電訊;2006年

4 潘震澤／譯;用意念來(lái)操控機(jī)器[N];中國(guó)商報(bào);2002年

5 陳丹;猴子可通過(guò)大腦控制光標(biāo)[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

6 徐勇;“多利之父”獲準(zhǔn)克隆人體胚胎[N];新華每日電訊;2005年

7 記者 王江;俄科學(xué)家培育出人體“永生細(xì)胞”[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李蓮蓮;感覺(jué)神經(jīng)節(jié)對(duì)腦運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的影響及其分子機(jī)制[D];蘭州大學(xué);2013年

2 周暉暉;運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元間突觸聯(lián)系的形態(tài)學(xué)，，電生理，以及模型研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

3 孫天威;組織工程化肌及成肌細(xì)胞移植的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2005年

4 李翔;低氧對(duì)成肌細(xì)胞體外分化的影響及其機(jī)制的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

5 劉征;神經(jīng)酰胺對(duì)神經(jīng)元和成肌細(xì)胞膜鈉通道的調(diào)控及其機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

6 吳海濤;Sema4C基因在成肌分化過(guò)程中的表達(dá)、功能及作用機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2007年

7 劉奔;Bhlhb5、SoxE與Necl-1在神經(jīng)發(fā)育和分化中的作用[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

8 矯力;GDNF受體RET與信號(hào)分子Rap1GAP相互作用及其功能的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

9 王承忠;三叉神經(jīng)中腦核發(fā)育的轉(zhuǎn)錄調(diào)控和內(nèi)側(cè)丘系軸突導(dǎo)向的分子機(jī)制[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2007年

10 王繼江;心迷走節(jié)前神經(jīng)元氨基酸能傳入的相互影響及P物質(zhì)和開(kāi)胃素的調(diào)制[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 辛銘;Islet1在小鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元后期發(fā)育中的作用[D];杭州師范大學(xué);2013年

2 李曉艷;光、電刺激對(duì)成肌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶大學(xué);2013年

3 翟克敏;過(guò)氧化氫調(diào)節(jié)成肌細(xì)胞線粒體移動(dòng)的初步研究[D];天津體育學(xué)院;2010年

4 高銘鞠;FAD24對(duì)小鼠成肌細(xì)胞增殖和分化的調(diào)節(jié)作用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 湯展毅;牛Myf6基因克隆及在成肌細(xì)胞中的表達(dá)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 高穎娜;脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元—骨骼肌細(xì)胞共培養(yǎng)體系的建立[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 葛昕;睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路對(duì)成人成肌細(xì)胞體外分化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

8 王麗霞;調(diào)控胰島素信號(hào)對(duì)成肌細(xì)胞增殖與分化的影響[D];西華大學(xué);2007年

9 文旭輝;豬PGC-1α、線粒體相關(guān)基因組織表達(dá)及Leptin對(duì)PGC-1α、UCPs mRNA表達(dá)的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

10 呂品;牛myostatin基因RNAi真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

本文編號(hào)：550437