本文關(guān)鍵詞：產(chǎn)腸毒性大腸桿菌DPO-PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用

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【摘要】：雙啟動(dòng)寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)是一種新型的引物設(shè)計(jì)方法,具有設(shè)計(jì)簡(jiǎn)易、特異性強(qiáng)以及退火溫度范圍寬的特點(diǎn)。以產(chǎn)腸毒性大腸桿菌LT基因?yàn)榘谢?設(shè)計(jì)了一對(duì)DPO引物,經(jīng)過(guò)對(duì)Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTP反應(yīng)體系因子的優(yōu)化,建立了產(chǎn)腸毒性大腸桿菌DPO-PCR檢測(cè)方法,測(cè)定了該方法的靈敏度、特異性以及退火溫度不敏感性。結(jié)果顯示,該方法檢測(cè)靈敏度為1.24×102CFU/ml,在45℃~65℃退火溫度范圍內(nèi),均可實(shí)現(xiàn)靶基因的高效擴(kuò)增。該方法特異性強(qiáng),測(cè)試菌株中4株產(chǎn)腸毒性大腸桿菌均為陽(yáng)性結(jié)果,其余菌株為陰性結(jié)果,且無(wú)非特異性擴(kuò)增發(fā)生。與常規(guī)PCR方法相比,DPO-PCR方法不需要對(duì)引物參數(shù)特別是退火溫度反復(fù)優(yōu)化,同時(shí)DPO引物的特殊結(jié)構(gòu)又增強(qiáng)了檢測(cè)特異性,為致病性微生物的快速準(zhǔn)確檢測(cè)提供了新方法。
【作者單位】： 黑龍江出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;海南出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;東北林業(yè)大學(xué)研究生院;
【關(guān)鍵詞】： 產(chǎn)腸毒性大腸桿菌 LT基因 DPO-PCR
【基金】：國(guó)家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012IK157) 質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)(201310126)資助項(xiàng)目
【分類(lèi)號(hào)】：R378;S852.612
【正文快照】： 產(chǎn)腸毒性大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起人和動(dòng)物腹瀉的主要病原菌[1-2]。初生仔豬、犢牛、羔羊等幼畜感染ETEC后,常因劇烈水樣腹瀉導(dǎo)致快速脫水而死亡,給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。在發(fā)展中國(guó)家,ETEC是嬰兒腹瀉的重要病因,也是發(fā)達(dá)國(guó)家“旅游者腹瀉

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【相似文獻(xiàn)】

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9 漆正宇;我國(guó)人博卡病毒的分子流行病學(xué)及衣殼蛋白獨(dú)有區(qū)表達(dá)純化的研究[D];貴州大學(xué);2007年

10 劉華;多重PCR檢測(cè)禽致病性大腸桿菌毒力基因方法的建立及應(yīng)用[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

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本文編號(hào)：542731