發(fā)布時間：2017-07-15 06:50

  本文關(guān)鍵詞：產(chǎn)腸毒性大腸桿菌DPO-PCR檢測方法的建立與應(yīng)用

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【摘要】：雙啟動寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)是一種新型的引物設(shè)計方法,具有設(shè)計簡易、特異性強以及退火溫度范圍寬的特點。以產(chǎn)腸毒性大腸桿菌LT基因為靶基因,設(shè)計了一對DPO引物,經(jīng)過對Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTP反應(yīng)體系因子的優(yōu)化,建立了產(chǎn)腸毒性大腸桿菌DPO-PCR檢測方法,測定了該方法的靈敏度、特異性以及退火溫度不敏感性。結(jié)果顯示,該方法檢測靈敏度為1.24×102CFU/ml,在45℃~65℃退火溫度范圍內(nèi),均可實現(xiàn)靶基因的高效擴增。該方法特異性強,測試菌株中4株產(chǎn)腸毒性大腸桿菌均為陽性結(jié)果,其余菌株為陰性結(jié)果,且無非特異性擴增發(fā)生。與常規(guī)PCR方法相比,DPO-PCR方法不需要對引物參數(shù)特別是退火溫度反復(fù)優(yōu)化,同時DPO引物的特殊結(jié)構(gòu)又增強了檢測特異性,為致病性微生物的快速準確檢測提供了新方法。
【作者單位】： 黑龍江出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心;海南出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心;東北林業(yè)大學(xué)研究生院;
【關(guān)鍵詞】： 產(chǎn)腸毒性大腸桿菌 LT基因 DPO-PCR
【基金】：國家質(zhì)檢總局科技計劃項目(2012IK157) 質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項(201310126)資助項目
【分類號】：R378;S852.612
【正文快照】： 產(chǎn)腸毒性大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起人和動物腹瀉的主要病原菌[1-2]。初生仔豬、犢牛、羔羊等幼畜感染ETEC后,常因劇烈水樣腹瀉導(dǎo)致快速脫水而死亡,給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。在發(fā)展中國家,ETEC是嬰兒腹瀉的重要病因,也是發(fā)達國家“旅游者腹瀉

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本文編號：542731