本文關(guān)鍵詞：siRNA真核表達(dá)載體對大鼠耳蝸前體細(xì)胞Notch3基因表達(dá)的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建Notch3基因的siRNA真核表達(dá)載體,探討其對大鼠耳蝸前體細(xì)胞中Notch3基因表達(dá)的影響。方法機(jī)械分離并胰酶消化新生大鼠耳蝸感覺上皮,懸浮培養(yǎng)基培養(yǎng)耳蝸前體細(xì)胞。根據(jù)Notch3基因序列設(shè)計(jì)并合成2對siRNA,插入pSilencer4.1-CMV neo載體,進(jìn)行酶切及測序鑒定。采用脂質(zhì)體法向大鼠耳蝸前體細(xì)胞轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒,采用Real time-PCR和Western blotting法檢測重組質(zhì)粒對Notch3基因的干擾效果。結(jié)果經(jīng)前體細(xì)胞標(biāo)記物Abcg2染色鑒定證實(shí)原代培養(yǎng)的細(xì)胞球?yàn)槎伹绑w細(xì)胞。酶切及測序鑒定證實(shí)成功構(gòu)建了siRNA真核表達(dá)載體pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2。Real-time PCR和Western blotting檢測結(jié)果顯示所構(gòu)建的Notch3基因真核表達(dá)載體成功地干擾了目的基因的表達(dá)。與空白對照組比較,轉(zhuǎn)染pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2的細(xì)胞Notch 3 mRNA和蛋白表達(dá)量均有明顯減少,而轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的細(xì)胞與空白對照組比較無顯著差異。結(jié)論成功構(gòu)建了大鼠Notch3基因的RNAi真核表達(dá)載體,該載體在大鼠耳蝸前體細(xì)胞中對Notch3基因的表達(dá)可發(fā)揮抑制作用。
【作者單位】： 西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻喉科;
【關(guān)鍵詞】： Notch 小分子干擾 耳蝸 前體細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30973300)~~
【分類號】：R329.492
【正文快照】： 感音神經(jīng)性聾嚴(yán)重影響著人們的健康和生存質(zhì)量,其主要病變部位位于耳蝸毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)元[1]。近年研究發(fā)現(xiàn),新生哺乳動(dòng)物耳蝸中存在一定數(shù)量的具有成體干細(xì)胞特點(diǎn)的前體細(xì)胞,是細(xì)胞移植治療感音神經(jīng)性聾極佳的種子細(xì)胞[2-4]。Notch370解放軍醫(yī)學(xué)雜志2013年5月1日第38卷第5

【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：531341