本文關(guān)鍵詞：miR-106bE靶向調(diào)控BMP2參與間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化與體內(nèi)骨形成

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【摘要】：目的:Micro RNA作為一類具有調(diào)節(jié)作用的小RNA分子,參與眾多生理過程。BMP2蛋白在間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)成骨分化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)探討了mi R-106b調(diào)控MSCs成骨分化及在小鼠糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松癥(GIOP)骨形成中的作用機(jī)制。方法:實(shí)時定量PCR(micro RNA特異性探針法或EVA Green法)確定mi R-106b在成骨分化過程中的變化趨勢及與成骨相關(guān)基因(RUNX2、ALP、OSTERIX、COL1A1)的相關(guān)性;生物信息學(xué)預(yù)測mi R-106b與BMP2的靶向性,利用mi R-106b mimic、mi R-106b inhibitor在MSCs過表達(dá)或缺失表達(dá)mi R-106b進(jìn)而確定mi R-106b的功能;熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)(Luciferase assay)與Western Blot檢測micro RNA與骨形成蛋白2(BMP2)之間的靶點(diǎn)關(guān)系;使用慢病毒-mi R-106b inhibitor干預(yù)小鼠糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松癥(GIOP);采用組織化學(xué)和micro-CT分析mi R-106b inhibitor對GIOP的影響;在m RNA和蛋白質(zhì)水平檢測骨形成和骨吸收相關(guān)的指標(biāo)及BMP2/SMAD信號通路涉及的分子;結(jié)果:實(shí)時定量PCR結(jié)果表明,mi R-106b在成骨分化過程中表達(dá)水平降低;過表達(dá)mi R-106b抑制MSCs成骨分化;在Luciferase assay中,結(jié)果顯示mimic共轉(zhuǎn)染組熒光值低于對照組,靶點(diǎn)突變后該效應(yīng)逆轉(zhuǎn);q RT-PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明轉(zhuǎn)染mi R-106b過表達(dá)降低BMP2 m RNA和蛋白質(zhì)水平,inhibitor則產(chǎn)生相反的效果;干預(yù)GIOP的實(shí)驗(yàn)中,mi R-106b inhibitor能夠增加骨質(zhì)量、提高成骨細(xì)胞數(shù)目、骨形成率,提高血清中PINP的水平,同時增加BMP2、SMAD1和SMAD5m RNA的表達(dá)水平。此外,mi R-106b inhibitor還降低了血清中CTx-1的水平。結(jié)論:在MSCs成骨分化過程中,mi R-106b靶向結(jié)合BMP2 3’UTR序列并抑制BMP2基因的表達(dá),進(jìn)而抑制MSCs的成骨分化。在C57BL/6小鼠中抑制mi R-106b表達(dá)可以活化BMP2/SMAD信號通路,促進(jìn)骨形成,從而緩解糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松癥。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 骨形態(tài)發(fā)生蛋白2 miR-106b 成骨分化 骨質(zhì)疏松癥
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 研究背景9-23
• 1.引言9
• 2. MicroRNA的產(chǎn)生及其發(fā)揮功能的機(jī)制9-10
• 3. 成骨細(xì)胞分化相關(guān)的信號通路及其相關(guān)的microRNA調(diào)控10-15
• 4. 總結(jié)15-16
• 參考文獻(xiàn)16-23
• 第一部分：間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程中microRNA的變化23-33
• 1. 材料與儀器23
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法23-27
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-31
• 4. 討論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-33
• 第二部分： miR-106b對PMSCs成骨分化的影響33-45
• 1. 材料33-34
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法34-39
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-42
• 4. 討論42-44
• 參考文獻(xiàn)44-45
• 第三部分： miR-106b體內(nèi)低表達(dá)緩解小鼠糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松癥45-58
• 1. 材料45-46
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法46-50
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-55
• 4. 討論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 總結(jié)與展望58-59
• 課題資助59-60
• 碩士研究期間完成的論文60-61
• 中英文對照縮詞表61-62
• 致謝62-64

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9 李R既，

本文編號：513117