本文關(guān)鍵詞：人組蛋白H3真核表達(dá)載體的構(gòu)建及功能初步檢測(cè)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建帶myc標(biāo)簽的人組蛋白H3基因真核表達(dá)載體,獲得Myc-H3融合表達(dá)蛋白,并對(duì)其功能進(jìn)行初步檢測(cè)。方法采用PCR技術(shù)從乳腺文庫(kù)中擴(kuò)增人H3基因編碼序列,將其正確插入pXJ-40-myc載體,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人胚腎293T細(xì)胞,Western blot法檢測(cè)融合蛋白表達(dá),通過(guò)免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)融合蛋白與已知結(jié)合蛋白組蛋白賴(lài)氨酸特異性去甲基化酶(LSD1)和組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶(EZH2)的相互作用。結(jié)果構(gòu)建得到組蛋白H3基因的真核表達(dá)載體,雙酶切鑒定得到與預(yù)期片段大小相符的外源基因插入片段,經(jīng)測(cè)序與目的序列完全一致;經(jīng)Western blot法檢測(cè),融合蛋白成功表達(dá);免疫共沉淀檢測(cè)證實(shí)Myc-H3融合蛋白可以和已知相互作用蛋白LSD1及EZH2相互作用。結(jié)論成功構(gòu)建組蛋白H3真核表達(dá)載體,該融合蛋白正確表達(dá)。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院腫瘤一科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;解放軍總醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【關(guān)鍵詞】： 甲基化 H LSD EZH 相互作用
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30872939,31100604)
【分類(lèi)號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 組蛋白是組成染色體的一種重要蛋白質(zhì),作為脫氧核糖核酸折疊時(shí)所依賴(lài)的線軸,在基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮重要作用�，F(xiàn)在已知的組蛋白有6種,分別為H1、H2A、H2B、H3、H4及古細(xì)菌組蛋白。作為該家族中重要成員之一的組蛋白H3,由于其結(jié)構(gòu)中包含著一球狀結(jié)構(gòu)域與長(zhǎng)的N端尾巴,是組成核小

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李新剛;陳燕;吳青;孫春艷;;姜黃素對(duì)人淋巴瘤Raji細(xì)胞組蛋白H3乙酰化作用的影響[J];癌癥;2006年05期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 陳寶安;趙慧慧;高沖;邵澤葉;夏國(guó)華;Dohner Konstanze;;丙戊酸鈉對(duì)骨髓增生異常綜合征細(xì)胞株MUTZ-1增殖和凋亡的影響[J];癌癥;2007年12期

2 徐莉;謝冠群;溫成平;范永升;;中藥及中藥有效成分對(duì)表觀遺傳作用的研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥雜志;2011年07期

3 景麗;梁建輝;;精神活性物質(zhì)對(duì)組蛋白乙�；揎椀挠绊慬J];生理科學(xué)進(jìn)展;2008年03期

4 張祥忠;尹愛(ài)華;劉建華;朱小玉;何敏;丁倩;陳運(yùn)賢;;丙戊酸鈉誘導(dǎo)K562細(xì)胞周期阻滯和凋亡并上調(diào)p~(21WAF1)基因mRNA的表達(dá)[J];中國(guó)病理生理雜志;2008年09期

5 張祥忠;尹愛(ài)華;許多榮;朱小玉;何敏;丁倩;李娟;陳運(yùn)賢;;丙戊酸鈉對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562增殖和凋亡的影響[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2008年05期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 趙晉燕;姜黃素HAT抑制活性與其抗腫瘤活性的相關(guān)性[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

2 李陶冉;丙戊酸鈉對(duì)K562細(xì)胞增殖、凋亡及HDAC1表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李新剛,陳燕,吳青,劉紅利;曲古菌素A調(diào)節(jié)NB4細(xì)胞組蛋白乙�；蚿21~(WAF1/CIP1)表達(dá)[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年01期

2 陳燕,吳裕丹,陳文娟,李惠玉,喻冬姣;姜黃素聯(lián)用γ-IFN對(duì)CyclinD_3、P27~(kip1)在HL-60細(xì)胞增殖中的影響[J];中華血液學(xué)雜志;2000年09期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐雪輝;曹仁賢;;高遷移率族蛋白A1翻譯后修飾及意義[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年01期

2 王理開(kāi);徐曉利;;真核細(xì)胞的活性基因[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1987年01期

3 劉杰;9號(hào)與22號(hào)染色體易位的雙親來(lái)源[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).計(jì)劃生育分冊(cè);1993年02期

4 朱益民,來(lái)茂德;BRCA1基因CpG島甲基化所致轉(zhuǎn)錄抑制作用具有位點(diǎn)特異性[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2002年02期

5 何芬;范海虹;謝瑤;牛道立;;GM-CSF基因重組腺病毒穿梭載體的構(gòu)建及XbaⅠ甲基化位點(diǎn)的應(yīng)用[J];解剖學(xué)研究;2006年03期

6 陳文成;潘尚領(lǐng);覃志堅(jiān);韋葉生;何印蕾;林偉雄;;廣西巴馬壯族長(zhǎng)壽老人p16基因甲基化[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2010年12期

7 陳文成;潘尚領(lǐng);覃志堅(jiān);韋葉生;何印蕾;林偉雄;;p16基因甲基化與156例廣西巴馬壯族老人長(zhǎng)壽的關(guān)系[J];中華老年多器官疾病雜志;2010年04期

8 周玉球;DNA甲基化分析技術(shù)的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2001年06期

9 劉軍須;張敬各;;同型半胱氨酸經(jīng)甲基化修飾下調(diào)去卵巢大鼠主動(dòng)脈雌激素受體α基因的表達(dá)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2008年03期

10 丁國(guó)富;李斌;吳

本文編號(hào)：496908