本文關(guān)鍵詞：α-甲基-DL-酪氨酸對黑腹果蠅腦內(nèi)酪氨酸羥化酶含量及行為活動的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：多巴胺(dopamine,DA)是一種兒茶酚胺遞質(zhì),在進化過程中高度保守。酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)作為多巴胺合成過程中的第一個酶,同時也是重要的限速酶,可以作為多巴胺能神經(jīng)元的特異性標志以確定其分布模式。α-甲基-DL-酪氨酸(α-MT)是TH的一種有效抑制劑,在體內(nèi)通過競爭性抑制來降低腦內(nèi)多巴胺水平。多巴胺信號的改變與人類神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,如帕金森病(Parkinson’s disease,PD)密切關(guān)聯(lián)。帕金森病是一種典型的神經(jīng)退行性疾病,常伴隨震顫、運動遲緩等癥狀。黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)對帕金森病關(guān)于其疾病機制的理解提供了顯著的貢獻。然而,目前關(guān)于帕金森病果蠅模型中多巴胺能神經(jīng)元缺失的不同報告中卻出現(xiàn)了互相矛盾的結(jié)果。本研究以黑腹果蠅這一經(jīng)典模型生物作為實驗材料,分別喂食濃度為0.5m M,0.75mM和1.0mM的α-MT抑制劑,在生長發(fā)育和負趨地性等生理活動方面與正常果蠅進行對比,結(jié)合免疫組化反應(yīng)結(jié)果來確定黑腹果蠅腦內(nèi)TH的分布情況,推測不同腦區(qū)多巴胺能神經(jīng)元的生理功能。試驗結(jié)果表明,α-MT能夠引起果蠅腦中TH陽性神經(jīng)元的缺失,這種缺失對果蠅的生理活動產(chǎn)生顯著影響。這種影響主要表現(xiàn)為,α-MT對黑腹果蠅的生長發(fā)育產(chǎn)生抑制作用,其生長周期隨著α-MT濃度的增大而逐漸延長,胚胎存活率、化蛹率和羽化的成蠅數(shù)量隨之減少。化蛹期間,不同濃度的實驗組與對照組的整體化蛹趨勢相同,但不同濃度的α-MT對黑腹果蠅蛹的長度影響均不顯著(P=0.189)。使用α-MT處理的黑腹果蠅負趨地性能力明顯下降,同時出現(xiàn)翅膀震顫、旋轉(zhuǎn)行為等帕金森病的癥狀。通過裝置標線的果蠅平均數(shù)目,實驗組和對照組相比差異均極顯著(P0.01)。免疫組化反應(yīng)結(jié)果顯示不同濃度施藥組出現(xiàn)了不同程度的TH陽性神經(jīng)元的缺失。濃度為1.0mM的實驗組黑腹果蠅缺失前腦后方外側(cè)的PPL1細胞群。隨著α-MT濃度的增大,束膜處的PAM細胞群存在不同程度的缺失,視葉區(qū)域的細胞群和纖維投射也隨抑制劑濃度的增大而呈現(xiàn)明顯缺失。推測PPL1細胞群可能與果蠅的運動能力有關(guān),PAM細胞群可能作為神經(jīng)激素調(diào)節(jié)果蠅的生長發(fā)育,視葉中的多巴胺能神經(jīng)元可能作為神經(jīng)調(diào)質(zhì)及神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)揮其生理功能。本次試驗通過構(gòu)建帕金森病果蠅模型,研究α-MT對黑腹果蠅腦內(nèi)TH含量及其行為活動的影響,揭示了果蠅的自發(fā)運動和多巴胺能神經(jīng)元之間的關(guān)系,推斷黑腹果蠅腦中不同區(qū)域內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元可能具有的生理功能,為深入研究多巴胺能神經(jīng)元缺失引起的神經(jīng)性疾病(如帕金森病)的病理機制的研究提供一些理論數(shù)據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：黑腹果蠅 酪氨酸羥化酶 抑制劑 行為失調(diào) 免疫組織化學(xué)
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5;R-332
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 1 引言9-12
• 2 實驗材料和方法12-15
• 2.1 實驗材料12-13
• 2.1.1 果蠅的培養(yǎng)12
• 2.1.2 實驗果蠅的培養(yǎng)12
• 2.1.3 實驗藥品12
• 2.1.4 實驗儀器12-13
• 2.2 黑腹果蠅生殖能力測定13
• 2.3 黑腹果蠅運動分析13
• 2.4 統(tǒng)計與分析13-14
• 2.5 黑腹果蠅腦切片的制備14
• 2.6 抗體的來源和特性14
• 2.7 免疫組化過程14-15
• 3 結(jié)果15-23
• 3.1 試驗梯度濃度的選擇15
• 3.2 實驗果蠅生殖能力測定15-18
• 3.2.1 黑腹果蠅首次出現(xiàn)幼蟲、化蛹和成蠅的時間15-17
• 3.2.2 黑腹果蠅每日化蛹的數(shù)量17
• 3.2.3 黑腹果蠅蛹的長度測定17-18
• 3.3 實驗果蠅運動能力測定18-19
• 3.4 黑腹果蠅水平切TH神經(jīng)元免疫組化反應(yīng)模式19-23
• 3.4.1 對照組果蠅水平切TH神經(jīng)元免疫組化反應(yīng)模式19-21
• 3.4.2 α-MT抑制劑處理的果蠅水平切TH神經(jīng)元免疫組化反應(yīng)模式21-23
• 4 討論23-29
• 4.1 α-MT致使黑腹果蠅生長周期延緩甚至停止23-24
• 4.2 α-MT使黑腹果蠅運動能力降低伴隨帕金森病癥狀24-25
• 4.3 α-MT處理的黑腹果蠅腦內(nèi)DA（TH）神經(jīng)元部分缺失25-27
• 4.4 果蠅帕金森病模型的科學(xué)意義27-29
• 5 結(jié)論29-31
• 參考文獻31-35
• 縮略語35-36
• 圖版說明36-38
• 圖版38-41
• 致謝41

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