本文關(guān)鍵詞：DOCK8缺陷小鼠哮喘模型建立與過敏機(jī)制探討及CD3ε免疫缺陷病臨床、免疫學(xué)特征分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分DOCK8缺陷小鼠哮喘模型建立與過敏機(jī)制探討目的:建立DOCK8缺陷小鼠哮喘易感模型并檢測DOCK8缺陷哮喘小鼠與野生對照哮喘小鼠氣道炎癥反應(yīng)、外周血以及脾內(nèi)IgE+B細(xì)胞百分比,探討IgE的變化在DOCK8缺陷小鼠哮喘模型過敏性炎癥中的意義及與IL-21的關(guān)系。方法:將6周清潔級DOCK8 KO小鼠(C57BL/6)和野生小鼠(C57BL/6)隨機(jī)分為實驗組(KO-ova),野生對照組(WT-ova)、KO對照組(KO-con)和空白對照組(WT-con),實驗組和野生對照組給予小劑量OVA致敏和激發(fā),KO對照組和空白對照組用PBS代替。在最后1次激發(fā)后的24 h內(nèi)檢測4組小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中IgE絕對值、細(xì)胞總數(shù)及細(xì)胞分類計數(shù);有創(chuàng)肺功能儀檢測小鼠氣道高反應(yīng)性;HE染色制作小鼠肺組織病理切片,光鏡下觀察病理變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠外周血和脾臟中IgE+B細(xì)胞百分比。實驗組、野生對照組和KO對照組分別在第一次激發(fā)后前3天、后3天和全6天給予20ng/天IL-21治療后重復(fù)觀察以上指標(biāo)。結(jié)果:哮喘模型實驗組(KO-ova)BALF細(xì)胞總數(shù)(6.15±0.9,n=8,P0.05)明顯高于其他3組(3.08±0.4,1.98±0.6,1.91±0.2,%,n=8,P0.05);嗜酸性粒細(xì)胞比例、氣道高反應(yīng)性與肺部炎癥反應(yīng)也相應(yīng)增高;野生對照組(WT-ova)與KO對照組(KO-con)和空白對照組(WT-con)比,氣道炎癥反應(yīng)有升高趨勢,氣道高反應(yīng)性基本無改變;實驗組(KO-ova)外周血及脾臟中IgE+B細(xì)胞明顯高于其他3組(blood3.12±0.3 vs 1.12±0.11,1.25±0.3,0.59±0.05,spleen2.01±0.13 vs0.81±0.06,0.78±0.09,0.43±0.06,%,n=8,P0.05%,n=8,P0.05);而給予IL-21治療后,除外氣道高反應(yīng)性,其他各項指標(biāo)均降低且結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義,其中治療期為第一次激發(fā)后的前3天和全6天的小鼠治療效果尤佳。結(jié)論:DOCK8缺陷小鼠哮喘易感模型建立成功,跟野生小鼠比DOCK8缺陷小鼠有哮喘易感性,且相同刺激條件下過敏性炎癥更重,而該易感性可能與其體內(nèi)IgE升高有關(guān);IL-21治療DOCK8缺陷哮喘小鼠可降低其IgE與炎癥反應(yīng),其機(jī)制可能與IL-21 IgE抗體類別轉(zhuǎn)換有關(guān)。第二部分:CD3ε缺陷致重癥聯(lián)合免疫缺陷病1例臨床及免疫學(xué)特征分析目的:探討1例由11q23染色體CD3E基因突變導(dǎo)致CD3ε缺陷重癥聯(lián)合免疫缺陷病臨床特征及免疫表型。方法:收集近期就診于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院的1例疑診CD3ε缺陷致重癥聯(lián)合免疫缺陷病患兒外周血標(biāo)本,提取外周血單個核細(xì)胞(PBMC)及核酸,CDR3掃描譜型技術(shù)分析T淋巴細(xì)胞受體(TCR)多樣性,定量PCR檢測TCR重排剪切環(huán)(TREC)含量,二代測序篩查免疫相關(guān)基因,一代測序驗證。結(jié)果:TCR Vβ亞家族表現(xiàn)為單克隆或寡克隆峰提示TCR重組受限;定量PCR未檢測到TREC含量提示TCR重組及T細(xì)胞胸腺輸出嚴(yán)重受損;二代測序顯示CD3E基因復(fù)合雜合突變,一代測序驗證證實。結(jié)論:通過臨床及免疫學(xué)分析、二代測序篩查及一代測序證實,確診1例CD3E基因復(fù)合雜合突變致CD3ε缺陷重癥聯(lián)合免疫缺陷病,該病例罕見且臨床與免疫學(xué)表型復(fù)雜,臨床診斷存在困難,導(dǎo)致漏診與延遲診斷,死亡率高且均為早期死亡,干細(xì)胞移植或基因治療是其唯一的根治手段,因此提高臨床工作者對本病的認(rèn)識對于早期診斷與針對性治療至關(guān)重要。
【關(guān)鍵詞】：DOCK8缺陷 哮喘 IgE IL-21 重癥聯(lián)合免疫缺陷病 CD3ε缺陷 二代測序 精準(zhǔn)醫(yī)療
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R-332;R725.6
【目錄】：

• 英漢縮略詞名詞對照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 第一部分：DOCK8缺陷小鼠哮喘易感模型建立及其過敏性炎癥機(jī)制探討12-39
• 前言12-14
• 1.材料和方法14-20
• 2.結(jié)果20-34
• 3.討論34-36
• 4.結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 第二部分：CD3ε 缺陷致重癥聯(lián)合免疫缺陷病臨床及免疫學(xué)特征分析39-50
• 前言39
• 1.材料和方法39-42
• 2.結(jié)果42-45
• 3.討論45-47
• 4.結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 全文總結(jié)50-51
• 文獻(xiàn)綜述51-57
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果及發(fā)表文章58

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3 魏s

本文編號：473720