發(fā)布時(shí)間：2017-06-22 19:01

  本文關(guān)鍵詞：鞘氨醇-1-磷酸受體-1結(jié)合肽的篩選及功能驗(yàn)證，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的蛋白鞘氨醇-1-磷酸受體-1(sphingosine-1-phosphate receptor-1,S1P1)在血管新生中發(fā)揮著關(guān)鍵性作用,并在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)。研究通過篩選S1P1篩選胞外區(qū)結(jié)合的功能肽段,觀察S1P1的抑制對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞增殖的影響。方法在大腸埃希菌BL21(DE3)中融合表達(dá)S1P1的胞外區(qū)1-46肽段,親和純化獲得了GST-S1P11-46融合蛋白,并以此目的蛋白為靶標(biāo),采用固相包被的方法對(duì)噬菌體隨機(jī)展示12肽庫(kù)進(jìn)行篩選,挑選有高親和力的噬菌體,經(jīng)測(cè)序得到陽性噬菌體的小肽序列;隨后,將小肽偶連在匙孔藍(lán)蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)上,并通過Western blot、細(xì)胞免疫熒光、成管實(shí)驗(yàn),觀察偶聯(lián)肽與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)表達(dá)的S1P1結(jié)合能力及對(duì)HUVEC管形成的影響,MTT檢測(cè)偶聯(lián)肽對(duì)肝癌細(xì)胞(human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2)增殖的影響。結(jié)果獲得了與S1P1有較高親和力的2種12肽。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)偶聯(lián)肽能結(jié)合細(xì)胞表面的S1P1受體,而且2種偶聯(lián)肽均能抑制HepG2的增殖,并抑制HUVEC細(xì)胞的成管行為。結(jié)論利用噬菌體肽庫(kù)篩選技術(shù),成功篩選出了具有抑制作用的S1P1結(jié)合肽。
【作者單位】： 武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;武警遼寧總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科;武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院腦系科中心;武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科;
【關(guān)鍵詞】： 鞘氨醇--磷酸受體- 噬菌體展示肽 血管生成 偶聯(lián)肽
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(11102235) 天津市自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(12JCZDJC24100)
【分類號(hào)】：R341
【正文快照】： 0引言鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)是具有重要生理功能的一種膜磷脂類分解代謝產(chǎn)物[1]。S1P既是細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的第二信使分子,又可以分泌至細(xì)胞外,作為胞外信號(hào)分子,通過與細(xì)胞表面的特定受體結(jié)合,參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、抗凋亡、細(xì)胞遷移、血管生成等過

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 鐘丹丹;高美華;李偉偉;張蓓;;CD59-linker-CD2融合基因真核表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2011年01期

2 鄭輝;薛松;黃日太;胡振雷;汪永義;;人生長(zhǎng)終止特異性同源盒基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2011年03期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 高美華;鐘丹丹;張蓓;;CD59-CD2對(duì)T細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用[J];免疫學(xué)雜志;2011年09期

2 徐小勇;孫禾;孫輝明;張鵬鵬;施毅;;增強(qiáng)和抑制表達(dá)E-鈣黏蛋白A549細(xì)胞株的構(gòu)建[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2013年03期

3 張勇;楊彤濤;胡運(yùn)生;廖博;文艷華;范清宇;;體外誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞向成骨細(xì)胞的分化[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2013年05期

4 鄭輝;薛松;連鋒;胡振雷;汪永義;;腺病毒介導(dǎo)Gax基因?qū)ρ宕碳ず笸醚芷交〖?xì)胞增殖和凋亡的影響[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年01期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 夏世金;錢桂生;胡明冬;黃勇;譚永紅;;低氧對(duì)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中Gax基因表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年03期

2 ;Down-regulation of the gax gene in smooth muscle cells of the splenic vein of portal hypertension patients[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2006年02期

3 萬文輝;吳恒芳;楊笛;張寄南;;大鼠心肌肌鈣蛋白I基因Lys184缺失突變重組腺病毒載體的構(gòu)建[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2008年04期

4 李敏利;朱人敏;;細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制蛋白在JAK/STAT信號(hào)通路中的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2009年03期

5 龐小娟;李曉軍;秦浚川;;腺病毒載體純化及在腫瘤基因治療中的應(yīng)用[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2009年12期

6 鄔俊;周秋明;吳元赭;;同源異形盒A10基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化及蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2010年01期

7 許波群;李瑛;薛凱;李梅;馬翔;刁飛揚(yáng);崔毓桂;劉嘉茵;;人SET基因小分子干擾RNA重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2010年02期

8 楊鏞,段志泉,辛世杰,陳翠菊,羅開元,時(shí)德;gax和HIF-1α基因在原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展;2005年01期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郭蕾 ,楊奎;生死命脈——血管的再生與死亡[J];國(guó)外科技動(dòng)態(tài);2002年01期

2 伍靜文,張端蓮,王瑞綿,楊勇,劉昱;雞胚尿囊絨毛膜法研究細(xì)胞間黏附分子-1在血管生成中的作用[J];解剖學(xué)報(bào);2003年05期

3 張瓊;張士勝;王玲;;一氧化氮與血管生成的研究進(jìn)展[J];國(guó)際眼科雜志;2007年03期

4 童曉紅;丁家望;;微顆粒與血管生成[J];國(guó)際心血管病雜志;2009年01期

5 趙婧;屈藝;母得志;;整合素與血管生成的研究進(jìn)展[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2010年02期

6 周飛燕;盧柳燕;韋劍;丘力功;黃明;;rhFGF-8a制備及其對(duì)雞胚絨毛尿囊膜血管生成的影響[J];廣西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年01期

7 何天源,陳詩書;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與血管生成[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).分子生物學(xué)分冊(cè);1997年05期

8 謝平,劉慶淮;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β與血管生成[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年08期

9 李斌,劉寧,張洪彬,焦存仙;HSVECs血管生成模型和HUVECs血管生成模型的比較[J];云南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年05期

10 鐘林,蔡端,余波,張延齡;電刺激改善下肢缺血及促進(jìn)骨骼肌血管生成的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)雜志;2003年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 唐堅(jiān)清;張聲;;血管內(nèi)皮細(xì)胞體外三維培養(yǎng)方法的比較[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 石英賢;朱依純;;缺血心肌的血管新生——從分子基礎(chǔ)到臨床應(yīng)用[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)論文匯編2005年第一期[C];2005年

3 李小明;喻紅;何春燕;王貞;吳潔;;血漿源性血管生成抑制素的生成與分離方法[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)第七屆第十四次學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2003年

4 趙改平;陳二云;沈力行;酈鳴陽;吳潔;;離散數(shù)學(xué)模型模擬實(shí)體腫瘤內(nèi)外的血管生成[A];中國(guó)力學(xué)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)大會(huì)'2009論文摘要集[C];2009年

5 李宗金;徐斌;盧士紅;鄭一州;楊仁池;王征宇;韓忠朝;;體外誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞血管生成和血管新生的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

6 蘭雨;劉兵;要暉宇;李芳菲;翁土軍;楊冠;李文龍;程萱;毛寧;楊曉;;內(nèi)皮細(xì)胞特異性Smad4基因敲除導(dǎo)致小鼠胚胎血管的重塑和完整性缺陷(英文)[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)“發(fā)育、遺傳和疾病”研討會(huì)論文匯編集[C];2007年

7 孫慧勤;鄒仲敏;陳意生;史景泉;卞修武;傅小嵐;;用內(nèi)源性過氧化酶顯色結(jié)合圖像分析法觀測(cè)微血管密度研究NDGA對(duì)血管生成的影響[A];面向二十一世紀(jì)的生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)和軍事病理學(xué)論文摘要匯編[C];2000年

8 Elly SW Ngan;Ernest HY Ng;H.Y.S.Ngan;William SB Yeung;;內(nèi)分泌腺體產(chǎn)生的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的空間與時(shí)相表達(dá)[A];澳門、香港、內(nèi)地生殖健康研討會(huì)論文集[C];2004年

9 谷慶陽;彭瑞云;王德文;;血管生成過程中促血管生成因子及其在內(nèi)皮細(xì)胞中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究進(jìn)展[A];第五屆全國(guó)生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議、第八屆全軍軍事病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議、第四屆全軍定量病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

10 張端蓮;伍靜文;王瑞綿;劉昱;楊勇;余英;;雞胚尿囊絨毛膜法分析細(xì)胞間粘附分子-1在血管生成中的作用[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐峰;腫瘤與血管生成息息相關(guān)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

2 文執(zhí) 編譯;抗癌新靶標(biāo) 腫瘤內(nèi)的血管[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

3 ;金風(fēng)送爽滿籃豐[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

4 張中橋;四醫(yī)大西京醫(yī)院發(fā)現(xiàn)納米�？勺� VEG F基因載體[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

5 通訊員 胡艷華 劉木根 記者 劉志偉;新的血管生成因子克隆成功[N];科技日?qǐng)?bào);2004年

6 ;扼住癌腫的咽喉[N];保健時(shí)報(bào);2003年

7 羅剛 黃文婧;干細(xì)胞技術(shù)有望用于角膜重建[N];健康報(bào);2005年

8 譚，

本文編號(hào)：472741