本文關鍵詞：鞘氨醇-1-磷酸受體-1結(jié)合肽的篩選及功能驗證，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的蛋白鞘氨醇-1-磷酸受體-1(sphingosine-1-phosphate receptor-1,S1P1)在血管新生中發(fā)揮著關鍵性作用,并在腫瘤細胞中高表達。研究通過篩選S1P1篩選胞外區(qū)結(jié)合的功能肽段,觀察S1P1的抑制對血管內(nèi)皮細胞及腫瘤細胞增殖的影響。方法在大腸埃希菌BL21(DE3)中融合表達S1P1的胞外區(qū)1-46肽段,親和純化獲得了GST-S1P11-46融合蛋白,并以此目的蛋白為靶標,采用固相包被的方法對噬菌體隨機展示12肽庫進行篩選,挑選有高親和力的噬菌體,經(jīng)測序得到陽性噬菌體的小肽序列;隨后,將小肽偶連在匙孔藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)上,并通過Western blot、細胞免疫熒光、成管實驗,觀察偶聯(lián)肽與人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)表達的S1P1結(jié)合能力及對HUVEC管形成的影響,MTT檢測偶聯(lián)肽對肝癌細胞(human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2)增殖的影響。結(jié)果獲得了與S1P1有較高親和力的2種12肽。細胞實驗證實偶聯(lián)肽能結(jié)合細胞表面的S1P1受體,而且2種偶聯(lián)肽均能抑制HepG2的增殖,并抑制HUVEC細胞的成管行為。結(jié)論利用噬菌體肽庫篩選技術,成功篩選出了具有抑制作用的S1P1結(jié)合肽。
【作者單位】： 武警后勤學院附屬醫(yī)院檢驗科;武警遼寧總隊醫(yī)院檢驗科;武警后勤學院附屬醫(yī)院腦系科中心;武警后勤學院附屬醫(yī)院藥劑科;
【關鍵詞】： 鞘氨醇--磷酸受體- 噬菌體展示肽 血管生成 偶聯(lián)肽
【基金】：國家自然科學基金青年項目(11102235) 天津市自然科學基金重點項目(12JCZDJC24100)
【分類號】：R341
【正文快照】： 0引言鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)是具有重要生理功能的一種膜磷脂類分解代謝產(chǎn)物[1]。S1P既是細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導的第二信使分子,又可以分泌至細胞外,作為胞外信號分子,通過與細胞表面的特定受體結(jié)合,參與調(diào)控細胞的增殖、分化、抗凋亡、細胞遷移、血管生成等過

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