本文關(guān)鍵詞：熱休克蛋白gp96作為新型佐劑增強(qiáng)BCG疫苗T細(xì)胞應(yīng)答，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核病是繼艾滋病之后,全世界由單一傳染性病原體引發(fā)的最大疾病。卡介苗(簡稱BCG)是用于預(yù)防結(jié)核病的疫苗,雖然卡介苗在很多地方仍然使用,但是不可忽略的是其疫苗效率逐年降低。不同地區(qū),不同年齡的人群接種后,卡介苗的效果都會(huì)有所不同。目前BCG的免疫效率在0-80%之間,免疫功效有待進(jìn)一步提高。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),熱休克蛋白gp96能通過抗原呈遞激活特異性T細(xì)胞并且具有天然佐劑功能。通過查閱大量文獻(xiàn),我們發(fā)現(xiàn)有關(guān)于乳鐵蛋白作為佐劑對(duì)BCG疫苗保護(hù)效率的研究。但由于乳鐵蛋白表達(dá)量低,純化操作復(fù)雜,因此沒有大規(guī)模的生產(chǎn)。受此啟發(fā),本研究以gp96作為BCG的新型佐劑聯(lián)合免疫C57BL/6小鼠,考察gp96是否活化BCG特異性T細(xì)胞,為增強(qiáng)BCG的免疫效率提供新的思路。本文首先利用實(shí)驗(yàn)室已有的gp96昆蟲表達(dá)載體表達(dá)gp96蛋白,然后對(duì)表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行純化并通過SDS-PAGE和Western Blot鑒定,結(jié)果顯示純度達(dá)到95%。利用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞內(nèi)因子染色技術(shù)檢測gp96是否增強(qiáng)BCG特異性細(xì)胞應(yīng)答,結(jié)果顯示gp96可以使BCG特異性的細(xì)胞免疫水平提高約50%。再通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清中的炎癥因子IFN-γ、IL-2、TnF-α、IL12、IL-10的分泌,分析得出gp96能有效提高血清中促炎癥因子的分泌,降低抗炎癥因子的分泌。進(jìn)一步研究gp96作為佐劑提高小鼠對(duì)BCG感染的免疫保護(hù)作用。分別在第一、二、四周免疫的小鼠,第五周BCG肺內(nèi)給藥48h后處死,取肺部組織研磨涂板,結(jié)果顯示BCG聯(lián)合gp96免疫比BCG單獨(dú)免疫組小鼠肺部活菌數(shù)降低36%。HE染色也可看出BCG+gp96免疫組肺部形態(tài)更完好。說明熱休克蛋白gp96可以有效降低BCG引起的肺部感染。最后通過對(duì)1,2和4周免疫的小鼠,第5周尾靜脈注射BCG攻毒。在尾靜脈攻毒后18天的觀察期內(nèi),BCG組免疫的小鼠比gp96+BCG組免疫的小鼠體重降幅明顯。綜上所述,gp96作為新型佐劑能有效增強(qiáng)BCG疫苗的T細(xì)胞應(yīng)答,這為提高BCG疫苗的免疫效率提供了新的思路,同時(shí)也為臨床開發(fā)gp96佐劑疫苗提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：BCG gp96 佐劑 結(jié)核
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 英文縮寫詞表7-10
• 第一章 前言10-22
• 1 熱休克蛋白gp96的概述10-18
• 1.1 熱休克蛋白概述10-11
• 1.2 熱休克蛋白90(HSP90)家族11
• 1.3 熱休克蛋白gp9611-18
• 1.3.1 gp96結(jié)構(gòu)特點(diǎn)12-14
• 1.3.2 gp96功能特點(diǎn)14-18
• 2 結(jié)核病的概述18-22
• 2.1 研究結(jié)核病的意義18-19
• 2.2 結(jié)核的發(fā)病機(jī)制19-20
• 2.3 結(jié)核分枝桿菌20-21
• 2.4 卡介苗與結(jié)核疫苗的現(xiàn)狀21-22
• 第二章 材料與方法22-32
• 1 實(shí)驗(yàn)材料22-24
• 1.1 質(zhì)粒、細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22
• 1.2 主要試劑及試劑盒22
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 1.4 主要溶液及試劑配置23-24
• 2 實(shí)驗(yàn)方法24-32
• 2.1 PCR擴(kuò)增24-25
• 2.2 質(zhì)粒的提取25-26
• 2.3 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化26
• 2.4 瓊脂糖凝膠電泳26-27
• 2.5 SDS-PAGE27
• 2.6 Western blot27-28
• 2.7 卡介苗(BCG)菌株的培養(yǎng)28
• 2.8 小鼠肺部給藥和尾靜脈攻毒28-29
• 2.9 脾臟淋巴細(xì)胞分離29
• 2.10 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)29-30
• 2.11 細(xì)胞內(nèi)因子染色30
• 2.12 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)30
• 2.13 小鼠肺部菌落形成單位的測定30-31
• 2.14 蘇木精-伊紅染色(H&E染色)31-32
• 第三章 結(jié)果32-44
• 1 gp96重組昆蟲表達(dá)載體的構(gòu)建32-34
• 1.1 引物設(shè)計(jì)32-33
• 1.2 目的基因的擴(kuò)增和重組33-34
• 2 目的蛋白的純化與鑒定34-38
• 2.1 目的蛋白的純化34-37
• 2.2 目的蛋白的鑒定37-38
• 3 gp96作為佐劑影響B(tài)CG特異性T細(xì)胞應(yīng)答38-44
• 3.1 gp96作為佐劑增強(qiáng)BCG特異性細(xì)胞應(yīng)答38-40
• 3.2 gp96作為佐劑促進(jìn)小鼠促炎癥因子的分泌,抑制抗炎癥因子分泌40-41
• 3.3 gp96作為佐劑可以降低結(jié)核桿菌引起的小鼠肺部損傷41-42
• 3.4 gp96作為佐劑可以有效降低小鼠死亡率42-44
• 第四章 討論44-46
• 主要參考文獻(xiàn)46-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文53

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1 任志剛;蔣建文;Valujskikh A;Baldwin Ⅲ WM;Fairchild RL;;同種異基因移植中T細(xì)胞應(yīng)答的研究進(jìn)展[J];中華移植雜志(電子版);2010年03期

2 王桂秋;;對(duì)甲型流感疫苗接種的人體細(xì)胞毒性T細(xì)胞應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué).生物制品分冊(cè);1982年02期

3 劉鳳玲,陳政良;C3與T細(xì)胞應(yīng)答的研究進(jìn)展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2005年S1期

4 肇靜嫻;曾耀英;江遜;季煜華;劉毅;;人胎盤絨毛提取物體外對(duì)T細(xì)胞應(yīng)答的抑制效應(yīng)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年12期

5 丁傳林;樹突狀細(xì)胞的發(fā)育、亞群及其對(duì)T細(xì)胞應(yīng)答類型的調(diào)控[J];上海免疫學(xué)雜志;2002年05期

6 唐漾波;唐小平;金俠;;人類免疫缺陷病毒1型特異性CD8~+T細(xì)胞應(yīng)答中人類白細(xì)胞抗原Ⅰ的限制位點(diǎn)[J];中華傳染病雜志;2007年09期

7 裘輝;涂永久;李小鳳;韓健;梁華平;;創(chuàng)傷小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答的能力變化[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年09期

8 張玨;譚雨龍;楊菲;朱波;;腫瘤環(huán)境影響抗感染CD8~+T細(xì)胞應(yīng)答啟動(dòng)的初步研究[J];免疫學(xué)雜志;2013年03期

9 魏升;T細(xì)胞應(yīng)答的抗原特異性抑制——禁抑的概念[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));1985年05期

10 杜民 ,陳景珍;獲得性免疫缺陷綜合征病人的抗原特異性多克隆的B細(xì)胞應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));1987年03期

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1 裘輝;涂永久;李小鳳;韓健;梁華平;;創(chuàng)傷小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答的能力降低[A];2009年全國危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

2 張曉莉;張紅軍;唐曉云;谷鴻喜;;非細(xì)胞毒性CD8~+ T細(xì)胞應(yīng)答-控制HIV感染的有效途徑[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會(huì)成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

3 黃旭東;木其日;吳陶亞;E.Oyungerel;阿拉坦高勒;;人質(zhì)子感知受體G2A基因的克隆、真核表達(dá)載體構(gòu)建及瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞[A];第11屆全國脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

4 陳兆軍;;結(jié)核桿菌特異性T細(xì)胞應(yīng)答體外檢測的應(yīng)用[A];2011年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

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1 段文利 謝靜;誰在艾滋病進(jìn)程中“垂簾聽政”[N];健康報(bào);2006年

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1 鐘茂華;可溶性HLA-G二聚體抑制同種T細(xì)胞應(yīng)答的研究[D];華中科技大學(xué);2008年

2 譚雨龍;補(bǔ)體C3在李斯特菌感染模型中調(diào)節(jié)CD8~+T細(xì)胞應(yīng)答收縮和記憶形成[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

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5 李蕾;SPC-A1細(xì)胞應(yīng)答呼吸道合胞病毒感染的敏感基因zlg10的克隆、表達(dá)及功能探討[D];武漢大學(xué);2005年

6 石云;Th17細(xì)胞及IL-17在幽門螺桿菌感染中的功能研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

7 陳立;幽門螺桿菌和甲型流感病毒特異性CD4~+T細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)應(yīng)答研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：423548