發(fā)布時間：2017-06-05 06:03

  本文關(guān)鍵詞：柯薩奇B3病毒誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生的自噬及其分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：柯薩奇B3病毒(Coxsackievirus B3, CVB3)是引起人類病毒性心肌炎(viral myocarditis, VMC)等多種疾病的主要病原微生物,在人群中的感染普遍存在。近年來,在我國和歐美各國急性病毒性心肌炎的發(fā)病率呈上升態(tài)勢,已成為青少年不明原因猝死的主要原因之一,嚴(yán)重威脅著人類的健康。目前,CVB3誘導(dǎo)的病毒性心肌炎的致病機(jī)制尚不完全清楚,所以針對該病毒的基礎(chǔ)研究對于疾病預(yù)防和治療顯得尤為重要。細(xì)胞自噬(autophagy, self-eating),是真核生物中進(jìn)化保守的對細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行周轉(zhuǎn)的分解代謝過程,通常能夠保持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。自噬的紊亂會導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生,并且這種胞內(nèi)的保守過程能夠被多種病原微生物利用來幫助其自身增殖進(jìn)而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。本研究旨在探討CVB3與自噬之間的關(guān)系以及CVB3誘導(dǎo)自噬的相關(guān)分子機(jī)制。首先用不同劑量的CVB3病毒和不同感染時間梯度處理細(xì)胞,經(jīng)Western blot檢測LC3-I和LC3-II的表達(dá)變化,同時借助激光共聚焦顯微鏡,利用GFP-LC3綠色熒光蛋白觀察自噬囊泡的形成；接著經(jīng)Western blot檢測p62蛋白變化水平,同時運(yùn)用mCherry-GFP-LC3穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株借助激光共聚焦顯微鏡觀察綠色熒光(GFP-LC3)、紅色熒光(mCherry-LC3)和黃色熒光(GFP+和mCherry+)的變化情況；并輔以LAMP1、LysoTracker等溶酶體Marker通過激光共聚焦顯微鏡觀察自噬溶酶體的定位；最后通過Western blot、Real-time PCR、流式細(xì)胞術(shù)、siRNA沉默等技術(shù)手段證明CVB3復(fù)制與自噬小體、溶酶體的關(guān)系。體外細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn),CVB3誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬呈現(xiàn)劑量梯度依賴和時間梯度依賴,并且激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果進(jìn)一步佐證了CVB3可以誘導(dǎo)自噬這一實驗結(jié)果；同時發(fā)現(xiàn)CVB3誘導(dǎo)形成的自噬囊泡呈現(xiàn)穩(wěn)定的紅色熒光且與溶酶體共定位形成自噬溶酶體,闡明了CVB3可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生一個完全自噬過程；且抑制自噬,病毒的復(fù)制能力減弱。綜上我們得出結(jié)論：CVB3可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生完全自噬,且自噬被抑制,病毒的復(fù)制能力減弱。提示細(xì)胞自噬可以在病毒增殖、成熟、致病等方面起到重要作用。同時該研究揭示的可能機(jī)制為病毒誘導(dǎo)的病毒性心肌炎等多種疾病的治療策略提供了線索和思路。
【關(guān)鍵詞】：柯薩奇B3病毒 自噬 病毒復(fù)制
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373.23;R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-14
• 第一部分 CVB3感染誘導(dǎo)自噬的發(fā)生：自噬小體的形成和積累14-24
• 材料和方法15-19
• 結(jié)果19-23
• 討論23-24
• 第二部分 CVB3感染誘導(dǎo)完全自噬過程的發(fā)生24-37
• 材料與方法25-26
• 結(jié)果26-35
• 討論35-37
• 第三部分 感染誘導(dǎo)產(chǎn)生的自噬小體幫助CVB3復(fù)制37-48
• 材料與方法38-41
• 結(jié)果41-47
• 討論47-48
• 結(jié)論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 綜述56-60
• 附錄60-61
• 碩士期間所修課程與成績61-62
• 致謝62-63

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