目的:探討琥珀酸G蛋白偶聯(lián)受體(GPR91)通路與低氧環(huán)境心肌細(xì)胞損傷之間的關(guān)系。方法:體外培養(yǎng)乳鼠原代心肌細(xì)胞,建立低氧模型,再利用siRNA干擾技術(shù)降低細(xì)胞內(nèi)GPR91的表達(dá),隨機(jī)分為陰性對照組(CTL)、CTL+siGPR91組、琥珀酸鹽組、琥珀酸鹽+siGPR91組、低氧CTL組、低氧CTL+si GPR91組、低氧琥珀酸鹽組和低氧琥珀酸鹽+siGPR91組。10%氧含量下培養(yǎng)5 d后,CCK-8法檢測心肌細(xì)胞的存活率、原代心肌細(xì)胞低氧模型的細(xì)胞ATP含量,Western blot法檢測心肌損傷相關(guān)蛋白鈣調(diào)素依賴蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)、B型尿鈉肽(BNP)、GPR91以及PI3K/Akt蛋白通路Akt及P-Akt的表達(dá)變化。結(jié)果:與CTL組比較,低氧環(huán)境下可見心肌細(xì)胞存活率降低,ATP含量減少,BNP及Ca MKⅡ表達(dá)上調(diào)(均為P<0.05);si RNA干擾組心肌細(xì)胞GPR91的表達(dá)水平下調(diào)(P<0.05),心肌細(xì)胞存活率上升、ATP含量增多、BNP及Ca MKⅡ蛋白表達(dá)下調(diào)、PI3K及下游信號分子Akt磷酸化水平降低(均為P<0.05)。結(jié)論:GPR9...

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圖2 原代心肌細(xì)胞的存活情況

原代心肌細(xì)胞的存活情況如圖2所示，常氧環(huán)境下，與CTL組相比，CTL+siGPR91組心肌細(xì)胞存活率未見明顯差異，加入琥珀酸后，細(xì)胞存活率出現(xiàn)降低(P<0.05),Suc+siGPR91組細(xì)胞存活率較Suc組升高(P<0.05)；低氧環(huán)境下，細(xì)胞存活率較常氧環(huán)境明顯降低，與C....

圖3 原代心肌細(xì)胞的ATP含量

原代心肌細(xì)胞的ATP含量見圖3。常氧環(huán)境下，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞ATP含量未見明顯變化，各組ATP含量的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。低氧環(huán)境下，CTL+siGPR91組及CTL組細(xì)胞ATP含量較常氧組出現(xiàn)下調(diào)，但組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；而Suc組及Suc+si....

圖4 原代心肌細(xì)胞低氧模型中GPR91、BNP及Ca MKⅡ蛋白的表達(dá)變化

常氧環(huán)境下，Suc及Suc+siGPR91組細(xì)胞的CaMKⅡ表達(dá)明顯較CTL組降低(P<0.01)，與Suc組比較，可見Suc+siGPR91組細(xì)胞CaMKⅡ隨著GPR91的敲低出現(xiàn)減少(P<0.01)，說明GPR91可能對其造成影響；低氧環(huán)境下，較常氧環(huán)境總體CaMK....

圖5 原代心肌細(xì)胞低氧模型中GPR91對Akt磷酸化的影響

為探討GPR91是否參與心肌細(xì)胞損傷的機(jī)制，我們選用siRNA技術(shù)干擾GPR91的表達(dá)，Westernblot法檢測干擾效果，可達(dá)到50%的抑制率，說明干擾成功，為下游信號分子通路的研究提供了基礎(chǔ)。低氧培養(yǎng)小室具有獨(dú)立、密閉性良好的特點(diǎn)，可直接放入現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞培養(yǎng)箱與其他....

本文編號：4024492