目的:體外研究大鼠牙囊干細(xì)胞成骨分化能力,根據(jù)miR-335成骨相關(guān)基因表達(dá)量的改變情況,從而明確miR-335對(duì)牙囊干細(xì)胞的成骨分化的作用。方法:雙向差速法體外分離培養(yǎng)大鼠牙囊干細(xì)胞,進(jìn)行成骨誘導(dǎo)。用茜素紅染色檢測(cè)成骨分化的能力,進(jìn)而用PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)檢測(cè)miR-335的表達(dá),并在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-335 mimics(pre-miR-335)or inhibitor(anti-miR-335)后成骨誘導(dǎo),用PCR和western-blot的方法檢測(cè)成骨能力的改變。結(jié)果雙向差速法培養(yǎng)的牙囊干細(xì)胞具有成骨樣細(xì)胞分化能力。成骨誘導(dǎo)的牙囊干細(xì)胞中miR-335表達(dá)降低,轉(zhuǎn)染miR-335 mimics后成骨能力降低,轉(zhuǎn)染miR-335 inhibitor后成骨能力升高。結(jié)論:雙向差速法培養(yǎng)的大鼠牙囊干細(xì)胞,可向成骨分化。在體外條件miR-335可以抑制牙囊干細(xì)胞的成骨分化。

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
內(nèi)容與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 研究對(duì)象
        1.2 主要試劑及配制方法
        1.3 RNA提取及RT-qPCR所需主要試劑
        1.4 western-blot相關(guān)主要試劑及耗材
        1.5 Western-blotting主要試劑的配制
        1.6 本研究所使用的主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備
        2.1 牙囊干細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-335的表達(dá)
        2.3 miR-335瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.4 Real-timePCR轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
        2.5 成骨相關(guān)基因檢測(cè)
        2.6 蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測(cè)
    3 質(zhì)量控制
    4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    5 技術(shù)路線
結(jié)果
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文
導(dǎo)師評(píng)閱表



本文編號(hào)：4016120