發(fā)布時間：2024-12-11 01:31

　　人角膜內(nèi)皮(Human Corneal Endothelium, HCE)由單層扁平的六角形HCE細(xì)胞構(gòu)成,是角膜和房水之間的重要屏障,其細(xì)胞密度及單層的完整性是維持角膜的正常厚度、透明度及視敏度的關(guān)鍵。成年后,已形成匯合單層的HCE細(xì)胞不僅喪失了增殖能力,而且還以每年0.3%-0.6%的速率死亡,局部細(xì)胞死亡后只能依賴臨近細(xì)胞的擴大和移行來修復(fù)單層的完整性。一旦受到外界創(chuàng)傷、感染及藥物毒害后,HCE細(xì)胞的死亡速率便會加快,將造成HCE細(xì)胞密度的迅速下降,輕者會引起角膜輕度水腫、透明度降低、視敏度下降,重者將導(dǎo)致HCE失代償,最終引起角膜內(nèi)皮盲(少于400～500細(xì)胞/mm2),使人失明�，F(xiàn)有研究結(jié)果顯示,成年后已喪失增殖能力的HCE細(xì)胞雖然被拘留在細(xì)胞周期的G1期,但仍保留有激活后恢復(fù)增殖的潛能。許多研究證實,接觸抑制和TGF-β2是體內(nèi)抑制HCE細(xì)胞增殖的主要原因,解除其接觸抑制狀態(tài)和加入TGF-β2印制劑能夠刺激HCE細(xì)胞重新恢復(fù)增殖能力,但其具體作用效果和分子機理仍有待于進(jìn)一步研究。除眼睛內(nèi)部的影響因素以外,太陽光中的紫外線(UV)也會對HCE細(xì)胞造成一定的氧化損傷作用,很可能也...

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 人角膜內(nèi)皮和人角膜內(nèi)皮細(xì)胞
        1.1 人角膜內(nèi)皮的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞獨有的形態(tài)特征
    2 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力及其影響因素
        2.1 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力
            2.1.1 細(xì)胞周期
            2.1.2 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的增殖特性
                2.1.2.1 增殖能力的年齡相關(guān)性
                2.1.2.2 增殖能力的區(qū)域相關(guān)性
        2.2 接觸抑制對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的抑制作用
        2.3 TGF-β2對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的抑制作用
            2.3.1 TGF-β的信號傳導(dǎo)通路
            2.3.2 TGF-β2對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響作用
        2.4 生長因子對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影響
        2.5 DNA氧化損傷對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影響
    3 刺激人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的研究進(jìn)展
        3.1 解除接觸抑制對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的激活研究
        3.2 持續(xù)的生長因子刺激對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的激活研究
        3.3 解除G1期抑制對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的激活研究
        3.4 其他因素對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的激活研究
            3.4.1 細(xì)胞外基質(zhì)
            3.4.2 ROCK抑制劑
    4 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的光損傷及其抗氧化保護(hù)劑
    5 本研究的目的和意義
第二章 解除細(xì)胞接觸抑制對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖能力的影響作用研究
    1 實驗材料與用品
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗藥品及試劑
        1.4 幾種主要溶液的配方
    2 實驗方法
        2.1 細(xì)胞接觸抑制對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響作用研究
            2.1.1 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及其接觸抑制模型的建立
            2.1.2 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的EdU滲入檢測
        2.2 EDTA解除接觸抑制對HCE細(xì)胞的影響作用研究
            2.2.1 EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)影響作用的光鏡檢測
            2.2.2 EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的EdU滲入檢測
            2.2.3 EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中骨架蛋白表達(dá)的免疫熒光檢測
            2.3.4 EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中功能蛋白表達(dá)的免疫熒光檢測
        2.3 Y-27632對EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響作用研究
            2.3.1 Y-27632處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的貼壁能力的光鏡檢測
            2.3.2 Y-27632處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的生長曲線測定
            2.3.3 Y-27632對EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)影響作用的光鏡檢測
            2.3.4 Y-27632對EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性影響作用的EdU滲入檢測
            2.3.5 Y-27632對EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)影響作用的免疫熒光檢測
            2.3.6 Y-27632對EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能蛋白表達(dá)影響作用的免疫熒光檢測
        2.4 接觸抑制人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中ROCK1及CKI的Western blot檢測
    3 實驗結(jié)果
        3.1 接觸抑制對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響作用
        3.2 EDTA對接觸抑制的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響作用
            3.2.1 EDTA對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及生長的影響
            3.2.2 EDTA對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞骨架的影響
            3.2.3 EDTA對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影響
        3.3 Y-27632對EDTA處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響作用
            3.3.1 Y-27632對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞貼壁能力的影響
            3.3.2 Y-27632對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞生長曲線的影響
            3.3.3 Y-27632對EDTA處理的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)的影響
            3.3.4 Y-27632對EDTA處理的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影響
            3.3.5 Y-27632對EDTA處理的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞骨架的影響
            3.3.6 Y-27632對EDTA處理的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能蛋白表達(dá)的影響
        3.4 Y-27632及EDTA對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中ROCK1和CKI表達(dá)的影響作用
    4 討論
    5 結(jié)論
第三章 TGF-B2對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖能力的影響作用及其分子機理研究
    1 實驗材料與用品
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗藥品及試劑
        1.4 幾種主要溶液的配方
    2 實驗方法
        2.1 TGF-β2對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響作用研究
            2.1.1 TGF-β2處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞活力的MTT法檢測
            2.1.2 TGF-β2處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的EdU滲入檢測
        2.2 TGF-β2調(diào)控HCE細(xì)胞增殖的信號通路研究
            2.2.1 TGF-β2抑制劑處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的EdU滲入檢測
            2.2.2 TGF-β2抑制劑處理人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的Smad信號通路蛋白及CKI表達(dá)的Westernblot檢測
    3 實驗結(jié)果
        3.1 TGF-β2對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性的影響作用
        3.2 Smad信號通路在TGF-β2調(diào)控人角膜內(nèi)細(xì)胞增殖中的作用
            3.2.1 TGF-β2及其信號通路抑制劑對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影響作用
            3.2.2 TGF-β2和SB431542對Smad信號通路蛋白及CKI表達(dá)的影響作用
    4 討論
    5 結(jié)論
第四章 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)
    1 實驗材料與用品
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗藥品及試劑
        1.4 幾種主要溶液的配方
    2 實驗方法
        2.1 建立人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的UVB誘導(dǎo)損傷模型
            2.1.1 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及生長狀態(tài)的光鏡檢測
            2.1.2 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞活力的MTT檢測
        2.2 UVB照射誘導(dǎo)人角膜內(nèi)皮細(xì)胞損傷的機理研究
            2.2.1 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中ROS水平的DHE染色檢測
            2.2.2 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中DNA氧化損傷的8-OHdG免疫熒光染色檢測
            2.2.3 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中p53、p-p53及p21^Cipl表達(dá)的Western blot檢測
        2.3 抗氧化劑對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究
            2.3.1 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞活力的MTT檢測
            2.3.2 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及生長狀態(tài)的光鏡檢測
            2.3.3 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中DNA氧化損傷的8-OHdG免疫熒光染色檢測
            2.3.4 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中ROS水平的DHE染色檢測
            2.3.5 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中p53、p-p53及p21^Cipl表達(dá)的Western blot檢測
    3 實驗結(jié)果
        3.1 UVB照射對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響作用
            3.1.1 UVB照射對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響作用
            3.1.2 UVB照射對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及生長的影響
            3.1.3 UVB照射人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)及生長的恢復(fù)
        3.2 UVB誘導(dǎo)人角膜內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的分子機理
            3.2.1 UVB照射對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中ROS水平的影響作用
            3.2.2 UVB照射人角膜內(nèi)皮細(xì)胞在恢復(fù)過程中ROS水平的變化
            3.2.3 UVB照射人角膜內(nèi)皮細(xì)胞在恢復(fù)過程中DNA氧化損傷的變化
            3.2.4 UVB照射人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中p53、p-p53及p21^Cipl表達(dá)的影響作用
        3.3 抗氧化劑對UVB誘導(dǎo)的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用
            3.3.1 四種抗氧化劑對人角膜內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響作用
            3.3.2 Asc-2P對UVB照射人角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及生長的影響作用
            3.3.3 Asc-2P對UVB照射的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞DNA氧化損傷的影響作用
            3.3.4 Asc-2P對UVB照射的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中ROS水平的影響作用
            3.3.5 Asc-2P對UVB照射的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中p53、p-p53及p21^Cipl表達(dá)的影響作用
    4 討論
    5 結(jié)論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷
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本文編號：4015973