發(fā)布時(shí)間：2024-05-07 23:59

　　目的建立間接ELISA,檢測血清中抗A型肉毒神經(jīng)毒素(botulinum neurotoxin type A, BoNT-A)中和抗體。方法以純化的BoNT-A作為包被抗原,抗BoNT-A兔血清作為一抗,辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)標(biāo)記的金黃色葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A, SPA)作為二抗,結(jié)合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),建立檢測血清中抗BoNT-A中和抗體的間接ELISA,驗(yàn)證該方法的特異性、靈敏度和重復(fù)性,并與經(jīng)典動物中和試驗(yàn)法檢測抗BoNT-A中和抗體的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果①間接ELISA條件的建立與優(yōu)化,使用2.50μg/mL純化的BoNT-A抗原包被,4℃過夜;1%明膠作為封閉劑,37℃封閉2 h;確定一抗優(yōu)化條件:反應(yīng)條件為1∶5 000稀釋,37℃孵育90 min;二抗優(yōu)化條件:反應(yīng)條件為1∶10 000稀釋,37℃孵育90 min;加入底物37℃顯色10 min,加終止液終止后,用酶標(biāo)儀測定A_{450 nm}值;②經(jīng)過驗(yàn)證該方法特異性好,所包被抗原與抗傷寒桿菌兔血清、抗破傷風(fēng)毒素兔血清、抗B型...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)動物
    1.3 主要試劑及儀器
    1.4 間接ELISA最佳工作條件的確立
        1.4.1 抗原包被濃度和一抗工作濃度的確定
        1.4.2 二抗最佳工作濃度的確立
    1.5 間接ELISA的優(yōu)化
        1.5.1 血清稀釋液的優(yōu)化
        1.5.2 抗原包被及封閉條件的優(yōu)化
        1.5.3 一抗工作條件的優(yōu)化
        1.5.4 二抗工作條件的優(yōu)化
        1.5.5 顯色時(shí)間的優(yōu)化
        1.5.6 間接ELISA的初步確立
    1.6 方法的驗(yàn)證
        1.6.1 特異性驗(yàn)證
        1.6.2 靈敏度驗(yàn)證
        1.6.3 重復(fù)性驗(yàn)證
    1.7 間接ELISA與動物中和試驗(yàn)法比較
        1.7.1 動物中和試驗(yàn)法標(biāo)定抗BoNT-A兔血清效價(jià)
        1.7.2 間接ELISA測定兔血清效價(jià)
        1.7.3 動物中和試驗(yàn)法與間接ELISA比較
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 間接ELISA最佳工作條件的確立
        2.1.1 抗原包被濃度和一抗工作濃度的確定
        2.1.2 二抗最佳工作濃度
    2.2 間接ELISA的優(yōu)化
        2.2.1 血清稀釋液的優(yōu)化
        2.2.2 抗原包被及封閉條件的優(yōu)化
        2.2.3 一抗工作條件的優(yōu)化
        2.2.4 二抗工作條件的優(yōu)化
        2.2.5 顯色時(shí)間的優(yōu)化
    2.3 方法的驗(yàn)證
        2.3.1 特異性驗(yàn)證
        2.3.2 靈敏度驗(yàn)證
        2.3.3 批內(nèi)重復(fù)性驗(yàn)證
        2.3.4 批間重復(fù)性驗(yàn)證
    2.4 建立的間接ELISA與動物中和試驗(yàn)法的比較
3 討 論



本文編號：3967190