抗血管內(nèi)皮生長因子單克隆抗體(VEGF-MA)能夠抑制腫瘤生長,具有良好的市場前景。本研究利用一株重組中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)細(xì)胞株表達(dá)VEGF-MA。首先對(duì)培養(yǎng)基種類進(jìn)行優(yōu)化,篩選最優(yōu)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、補(bǔ)料培養(yǎng)基和外源添加物。研究結(jié)果表明:最有利于重組CHO細(xì)胞株表達(dá)VEGF-MA的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、補(bǔ)料培養(yǎng)基和外源添加物分別為ActiCHO P Powder CD、CD Efficient Feed C AG和Sheff-CHO Plus PF ACF。利用這一培養(yǎng)基配比在搖瓶和3 L發(fā)酵罐中培養(yǎng)重組CHO細(xì)胞,VEGF-MA產(chǎn)量均可達(dá)到3. 20 g/L。在3L發(fā)酵罐中進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)條件,結(jié)果表明:最優(yōu)的接種密度、pH、溶解氧濃度、前期培養(yǎng)溫度和后期培養(yǎng)溫度分別為1. 0×10⁶個(gè)/mL、7. 10、40%、36. 5℃和34℃,此時(shí)的VEGF-MA產(chǎn)量能夠達(dá)到4. 10 g/L。VEGFMA質(zhì)量指標(biāo)均處于標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi):電荷異質(zhì)性、糖基化水平和蛋白純度分別為26. 1%、59. 1%和95. 1%。

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞株
    1.2 培養(yǎng)基
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇及搖瓶擴(kuò)增
        1.3.2 搖瓶培養(yǎng)
        1.3.3 3 L發(fā)酵罐培養(yǎng)
    1.4 檢測方法
        1.4.1 VEGF-MA濃度檢測
        1.4.2 VEGF-MA純化
        1.4.3 糖基化水平檢測
        1.4.4 蛋白純度檢測
        1.4.5 電荷異質(zhì)性檢測
2 結(jié)果與討論
    2.1 培養(yǎng)基優(yōu)化
        2.1.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基優(yōu)化
        2.1.2 補(bǔ)料培養(yǎng)基優(yōu)化
        2.1.3 外源添加物優(yōu)化
    2.2 3 L發(fā)酵罐培養(yǎng)條件優(yōu)化
        2.2.1 接種密度優(yōu)化
        2.2.2 pH優(yōu)化
        2.2.3 DO優(yōu)化
        2.2.4 前期培養(yǎng)溫度優(yōu)化
        2.2.5 后期培養(yǎng)溫度優(yōu)化
3 結(jié)論



本文編號(hào)：3964613