目的:研究牛膝多肽(ABPP)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞向神經(jīng)元分化的作用,初步探討ABPP作用于PC12細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。方法:以體外培養(yǎng)的PC12細(xì)胞為研究模型,觀察在低血清的情況下不同濃度ABPP(0.25、0.50、1.00μg/ml)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞發(fā)生的形態(tài)學(xué)改變。采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法,觀察神經(jīng)絲蛋白(NF-H)在ABPP誘導(dǎo)分化的PC12細(xì)胞中的表達(dá);采用Western blot法觀察ABPP(1.0μg/ml)加藥后不同時(shí)間段(0、6、12h和1、2、3、7d)和不同濃度ABPP(0.25、0.50、1.00μg/ml)加藥2 d后對(duì)PC12細(xì)胞ERK1/2活性的影響,同時(shí)應(yīng)用ERK1/2特異性拮抗劑PD98059與ABPP共培養(yǎng)PC12細(xì)胞,分析ABPP對(duì)PC12細(xì)胞的作用與ERK1/2通路的關(guān)系。結(jié)果:ABPP處理3 d后,部分PC12細(xì)胞開始出現(xiàn)神經(jīng)元樣的形態(tài)。隨著加藥時(shí)間延長具有神經(jīng)元樣的細(xì)胞逐漸增多,到7 d時(shí),可以見到神經(jīng)生長因子(NGF)和ABPP處理組PC12細(xì)胞的突起都顯著增多,能形成網(wǎng)絡(luò);14 d時(shí),這種現(xiàn)象愈發(fā)顯著。加藥后7 d和14 d,ABPP各濃度...

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圖1ABPP誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化14d的光鏡觀察結(jié)果（×400）

12細(xì)胞分化率以及細(xì)胞突起長度。結(jié)果表明，于加藥后7d和14dABPP各濃度組的細(xì)胞分化率以及細(xì)胞突起長度均明顯高于空白對(duì)照組（P＜0．01），且存在明顯的量效關(guān)系（表1）。2．2ABPP誘導(dǎo)PC12細(xì)胞神經(jīng)元性分化的檢測(cè)7d和14d后采用抗NF-H的抗體，通過免疫A：培養(yǎng)14d....

圖2ABPP誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化14d的NF-H熒光染色結(jié)果

表1ABPP對(duì)PC12細(xì)胞分化的影響Table1EffectsondifferentiationofPC12cellsbyABPP組別ControlNGFABPP濃度（μg／ml）00．050．250．501．00視野數(shù)15151515157d細(xì)胞分化率（％）066．05±8．4....

圖5PD98059對(duì)ABPP（1．0μg／ml）誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞

2細(xì)胞觀察ABPP介導(dǎo)的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，側(cè)重研究了MAPK／ERK級(jí)聯(lián)途徑，以初步探討ABPP促神經(jīng)生長、維持神經(jīng)元存活的可能作用機(jī)制。MAPK信號(hào)通路是參與細(xì)胞生長、發(fā)育、分裂以及細(xì)胞間功能同步等多種生理功能的最主要的p-ERK1／24244ERK1／24244Control....

圖4ABPP（1．0μg／ml）不同作用時(shí)間對(duì)PC12細(xì)胞ERK1／2

03．002．502．001．501．000．500．00p-ERK1／2／ERK1／2*與陰性對(duì)照組相比，*P＜0．05。圖5PD98059對(duì)ABPP（1．0μg／ml）誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞ERK1／2活性的影響Figure5PD98059resistanceonERK1／2ph....

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