輪狀病毒(Rotavirus,RV)屬呼腸孤病毒科,輪狀病毒屬,基因組由11段分節(jié)段RNA組成,分別編碼6種結構蛋白(VP1-4,6,7)和6種非結構蛋白(NSP1-6),分別在RV的吸附、侵入、復制、裝配和釋放等環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。RV的感染可引起宿主細胞內多種成分的異常表達,其中就有miRNAs。作為非編碼的小RNA,其在組織和器官的生長發(fā)育、新陳代謝、疾病發(fā)生及病原體侵染等多種領域中所參與的調控機制一直是人們研究和討論的熱點。在預實驗中我們對感染RV的MA104細胞進行了 miRNAs表達譜分析,發(fā)現miR-7的表達水平顯著上調,因此我們將miR-7列為探究RV復制調控機制的研究對象。目的:本論文旨在探究RV感染過程中miR-7的作用,調控的靶基因、調控RV復制的機制和參與的信號通路等。方法:在確認miR-7為研究對象后,首先我們在體外(MA104細胞)和體內(Balb/c乳鼠模型),通過過表達/抑制miR-7,檢測miR-7對RV復制的作用。針對病毒基因,我們通過數據庫分析預測和雙熒光素酶報告實驗確認RV的NSP5基因為miR-7靶基因,進一步通過共轉染pEGFP-N2-NS...

【文章頁數】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．感染ＲＶ前后的ｍｉＲＮＡｓ表達譜分析??Ｆｉｇ．?２．?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ?ｂｅｆｏｒｅ?ａｎｄ?ａｆｔｅｒ?ＲＶ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??

１．１我們ＲＶＺＴＲ－６８株（Ｇ１Ｐ［８］）感染前后的ＭＡ１０４細胞進行ｍｉＲＮＡｓ的表達??譜差異分析，結果發(fā)現感染ＲＶ后，細胞內多種ｍｉＲＮＡｓ表達均出現上調的現象??（圖２）。在后續(xù)的實驗中，我們進一步發(fā)現ｍｉＲ－７在細胞感染輪狀病毒后的上??調效果較為穩(wěn)定，故選其作為探宄....

圖４．?ＭＡＩ０４細胞感染不同基因型（ａ）及不同ＭＯＩ?（ｂ）?ＲＶ后的ｍｉＲ－７表達??

?中國醫(yī)學科學院北京協和醫(yī)學院碩士研宄生學位論文２、ＭＡ１０４細胞感染不同基因型（Ｇｌ，Ｇ２，Ｇ４，Ｇ９）及不同ＭＯＩ?（０．０５，?０．０．２，０．５，１）輪狀病毒的ｍｉＲ－７表達水平??ＲＶ感染ＭＡ１０４細胞３６ｈ時ｍｉＲ－７的表達達到頂峰，因此我們分別用基因型及不同ＭＯＩ的....

圖５．?ＨＴ－２９和Ｃａｃｏ－２細胞感染ＲＶ后的ｍｉＲ－７表達??Ｆｉ．?５．?ｍｉＲ－７?ｅｘｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＴ－２ａｎＣａｃｏ－２?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＲＶ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??

－Ｉ?〇??＊?ｍ?ｆｖｉＯＣＫ?ｇ－???Ｔ?Ｊ－?ＥＧ１?１??ｉ???圍＊?■ＥＧ９?ｒ??Ｌｌｉｓｌ?Ｉ：??ｏ＇＂?＆?〇?０．１?０．５?１?２??令０?ＭＯＩ??ａ?ｂ??Ｉ０４細胞感染不同基因型（ａ）及不同ＭＯＩ?（ｂ）?ＲＶ后的ｍＲ－７?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉ....

圖７．免疫熒光檢測ＭＡ１０４細胞內ｍｉＲ－７上下調時ＲＶ的復制情況（左：藍色為??ＤＡＰＩ、紅色為ＲＶ；右：ＲＶ陽性細胞統(tǒng)計）??

（ＭＯＩ＝０．０５），并于種毒１２ｈ后進行免疫熒光實驗來檢測輪狀病毒復制情況。??結果顯示，細胞內ｍｉＲ－７表達的上調能夠顯著抑制病毒的復制且當下調ｍｉＲ－７??的表達時，ＲＶ的復制情況要高于對照組（圖７）。通過免疫熒光（Ｇｏａｔ－ａｎｔｉ－ＲＶ），??我們可以很直觀的確認ｍｉＲ....

本文編號：3936792