輪狀病毒(Rotavirus,RV)屬呼腸孤病毒科,輪狀病毒屬,基因組由11段分節(jié)段RNA組成,分別編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白(VP1-4,6,7)和6種非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1-6),分別在RV的吸附、侵入、復(fù)制、裝配和釋放等環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。RV的感染可引起宿主細(xì)胞內(nèi)多種成分的異常表達(dá),其中就有miRNAs。作為非編碼的小RNA,其在組織和器官的生長發(fā)育、新陳代謝、疾病發(fā)生及病原體侵染等多種領(lǐng)域中所參與的調(diào)控機(jī)制一直是人們研究和討論的熱點(diǎn)。在預(yù)實(shí)驗(yàn)中我們對(duì)感染RV的MA104細(xì)胞進(jìn)行了 miRNAs表達(dá)譜分析,發(fā)現(xiàn)miR-7的表達(dá)水平顯著上調(diào),因此我們將miR-7列為探究RV復(fù)制調(diào)控機(jī)制的研究對(duì)象。目的:本論文旨在探究RV感染過程中miR-7的作用,調(diào)控的靶基因、調(diào)控RV復(fù)制的機(jī)制和參與的信號(hào)通路等。方法:在確認(rèn)miR-7為研究對(duì)象后,首先我們?cè)隗w外(MA104細(xì)胞)和體內(nèi)(Balb/c乳鼠模型),通過過表達(dá)/抑制miR-7,檢測(cè)miR-7對(duì)RV復(fù)制的作用。針對(duì)病毒基因,我們通過數(shù)據(jù)庫分析預(yù)測(cè)和雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)確認(rèn)RV的NSP5基因?yàn)閙iR-7靶基因,進(jìn)一步通過共轉(zhuǎn)染pEGFP-N2-NS...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．感染ＲＶ前后的ｍｉＲＮＡｓ表達(dá)譜分析??Ｆｉｇ．?２．?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ?ｂｅｆｏｒｅ?ａｎｄ?ａｆｔｅｒ?ＲＶ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??

１．１我們ＲＶＺＴＲ－６８株（Ｇ１Ｐ［８］）感染前后的ＭＡ１０４細(xì)胞進(jìn)行ｍｉＲＮＡｓ的表達(dá)??譜差異分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)感染ＲＶ后，細(xì)胞內(nèi)多種ｍｉＲＮＡｓ表達(dá)均出現(xiàn)上調(diào)的現(xiàn)象??（圖２）。在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)ｍｉＲ－７在細(xì)胞感染輪狀病毒后的上??調(diào)效果較為穩(wěn)定，故選其作為探宄....

圖４．?ＭＡＩ０４細(xì)胞感染不同基因型（ａ）及不同ＭＯＩ?（ｂ）?ＲＶ后的ｍｉＲ－７表達(dá)??

?中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研宄生學(xué)位論文２、ＭＡ１０４細(xì)胞感染不同基因型（Ｇｌ，Ｇ２，Ｇ４，Ｇ９）及不同ＭＯＩ?（０．０５，?０．０．２，０．５，１）輪狀病毒的ｍｉＲ－７表達(dá)水平??ＲＶ感染ＭＡ１０４細(xì)胞３６ｈ時(shí)ｍｉＲ－７的表達(dá)達(dá)到頂峰，因此我們分別用基因型及不同ＭＯＩ的....

圖５．?ＨＴ－２９和Ｃａｃｏ－２細(xì)胞感染ＲＶ后的ｍｉＲ－７表達(dá)??Ｆｉ．?５．?ｍｉＲ－７?ｅｘｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＴ－２ａｎＣａｃｏ－２?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＲＶ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??

－Ｉ?〇??＊?ｍ?ｆｖｉＯＣＫ?ｇ－???Ｔ?Ｊ－?ＥＧ１?１??ｉ???圍＊?■ＥＧ９?ｒ??Ｌｌｉｓｌ?Ｉ：??ｏ＇＂?＆?〇?０．１?０．５?１?２??令０?ＭＯＩ??ａ?ｂ??Ｉ０４細(xì)胞感染不同基因型（ａ）及不同ＭＯＩ?（ｂ）?ＲＶ后的ｍＲ－７?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉ....

圖７．免疫熒光檢測(cè)ＭＡ１０４細(xì)胞內(nèi)ｍｉＲ－７上下調(diào)時(shí)ＲＶ的復(fù)制情況（左：藍(lán)色為??ＤＡＰＩ、紅色為ＲＶ；右：ＲＶ陽性細(xì)胞統(tǒng)計(jì)）??

（ＭＯＩ＝０．０５），并于種毒１２ｈ后進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)輪狀病毒復(fù)制情況。??結(jié)果顯示，細(xì)胞內(nèi)ｍｉＲ－７表達(dá)的上調(diào)能夠顯著抑制病毒的復(fù)制且當(dāng)下調(diào)ｍｉＲ－７??的表達(dá)時(shí)，ＲＶ的復(fù)制情況要高于對(duì)照組（圖７）。通過免疫熒光（Ｇｏａｔ－ａｎｔｉ－ＲＶ），??我們可以很直觀的確認(rèn)ｍｉＲ....

本文編號(hào)：3936792