目的:抗人CD25單克隆抗體(巴利昔單抗)是臨床器官移植常用的免疫誘導治療藥物,雖然理論上其主要通過阻斷T淋巴細胞激活的第三信號發(fā)揮免疫抑制作用,但其對T細胞活化、增殖以及細胞因子分泌的影響卻鮮有報道。本實驗通過在體外建立穩(wěn)定的抗原非特異性T淋巴細胞反應體系及同種異體抗原特異性混合淋巴細胞反應(MLR)體系,利用舒萊(巴利昔單抗,Novartis)進行干預,觀察舒萊抑制T細胞活化及增殖反應的強度,為闡明巴利昔單抗的免疫學作用機制提供實驗證據。方法:體外分別建立抗原特異性人T淋巴細胞反應及抗原非特異性人T淋巴細胞反應體系。其中抗原非特異性T淋巴細胞反應是利用抗人CD3/CD28抗體直接刺激T細胞活化增殖,刺激后第3天使用抗人CD3、CD4、CD8、CD25及CD69等流式抗體檢測反應性T細胞活化及增殖情況,并留取培養(yǎng)體系的上清做細胞因子檢測。而抗原特異性T淋巴細胞反應則是首先分離不同健康人外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),其中一個個體的PBMC作為MLR的反應細胞,另一個體的PBMC進行放射照射滅活后作為MLR的刺激細胞,應...

【文章頁數】：45 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.在T細胞未活化的對照組中，與正常對照和二抗對照組相比，舒萊結合組IgG二抗的G.Mean值較高

體外分離人PBMC，與舒萊在4°共孵育30分鐘，之后再加入抗人Ig抗來檢測舒萊在體外與T細胞的結合率。結果如圖1所示，舒萊在體外與T細胞結合作用未受影響。且隨著T活化程度的增高，舒萊的結合率越高。

圖2.因T細胞增殖存在個體差異，故本實驗T細胞增殖率以抗人CD3/CD28抗體刺激組為標準，刺激組增殖率記為100%

圖2.因T細胞增殖存在個體差異，故本實驗T細胞增殖率以抗人CD3/CD28抗體刺激組為標準，刺激組增殖率記為100%�？笴D3/CD28抗體刺激3天后CD4+T和CD8+T的增殖情況用流式進行分析。利用flowjo（流式分析軟件）圈出總淋巴細....

圖4.通過設立陰性對照組、單加CD25抗體組和加入舒萊（Simulect）孵育后再加CD25抗

CD25G.Mean值的下降有顯著差異,且由圖可見，低濃度（0.001μg/ml-0.01μg/ml）與不同濃度間CD25G.Mean值也有明顯差異。圖E、F結果顯示，加入不同濃度舒萊后，CD4+T和CD8+T細胞表面CD69表達有所上升，且高濃度組（0.1μg....

圖5.應用CBA技術進行細胞因子檢測并用Flowjo分析細胞因子IL-2和IFN-γ分泌情況

體后檢測CD25流式抗體的結合情況，并使用流式進行分析�？梢钥吹剑尤胧嫒R組和單加CD25流式抗體組CD25流式抗體結合情況并無差異，提示CD25流式抗體并未與舒萊競爭性結合。4.使用舒萊后不能抑制T淋巴細胞產生IL-2而對分泌IFN-γ有輕微的抑制作用....

本文編號：3932678