目的構(gòu)建人HMG盒轉(zhuǎn)錄因子1(HMG-box transcription factor 1,HBP1)基因shRNA質(zhì)粒,并探討該基因的相關(guān)功能。方法合成HBP1基因干擾序列,將其插入至慢病毒表達(dá)載體pLL3. 7中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pLL3. 7-shHBP1,經(jīng)TurboFectTM脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,收集含病毒的培養(yǎng)基,分別感染HeLa及HepG2細(xì)胞,經(jīng)puromycin持續(xù)篩選,獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。Real-time PCR及Western blot法分別檢測HeLa及HepG2細(xì)胞中HBP1基因m RNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平,MTT及流式細(xì)胞術(shù)分別檢測HBP1基因抑制對HeLa細(xì)胞增殖及凋亡的影響。結(jié)果經(jīng)測序鑒定,重組質(zhì)粒pLL3. 7-shHBP1構(gòu)建正確。HeLa及HepG2細(xì)胞中HBP1基因mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平均明顯下調(diào)(P <0. 01);HBP1基因抑制后,HeLa細(xì)胞的增殖速度明顯加快(P <0. 01),細(xì)胞凋亡明顯減少(P <0. 01)。結(jié)論成功構(gòu)建了HBP1基因shRNA質(zhì)粒,抑制HBP1表達(dá)后可使HeLa細(xì)胞的增殖速度加...

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圖2Westernblot法檢測各組細(xì)胞中HBP1蛋白的表達(dá)

與相應(yīng)對照組比較，HeLa-shHBP1-1、HeLa-shHBP1-2、HepG2-shHBP1-1、HepG2-shHBP1-2組細(xì)胞中HBP1蛋白的水平顯著下降，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t分別為23.10、56.18、23.81、15.27,P<0.01），見圖2和圖3。表明各....

圖3各組細(xì)胞中HBP1蛋白的表達(dá)水平

圖2Westernblot法檢測各組細(xì)胞中HBP1蛋白的表達(dá)2.4HBP1基因抑制對Hela細(xì)胞增殖的影響

圖4MTT法測定HeLa細(xì)胞的生長曲線

對照組及HeLa-shHBP1-1組HeLa細(xì)胞的凋亡率分別為45.37%和25.1%。與對照組比較，穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株HeLashHBP1-1抑制HBP1后，細(xì)胞凋亡明顯減少，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=7.47,P<0.01），見圖5。圖5流式細(xì)胞術(shù)檢測HBP1基因抑制對HeLa細(xì)胞凋....

圖5流式細(xì)胞術(shù)檢測HBP1基因抑制對HeLa細(xì)胞凋亡的影響

圖4MTT法測定HeLa細(xì)胞的生長曲線3討論

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