目的探索高糖(high glucose, HG)促進體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細胞(human dermal fibroblasts, HDFs)的衰老條件,建立高糖老化模型;觀察胎盤間充質(zhì)干細胞來源的外泌體(exosomes, Exos)對高糖培養(yǎng)的成纖維細胞增殖、遷移及衰老的影響。方法分離人包皮組織的HDFs。實驗分為3組:正常對照組(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG1組(26 mmol/L葡萄糖)、HG2組(35 mmol/L葡萄糖)。CCK-8試劑盒檢測各組細胞在1、3、5、7 d的增殖情況;各組培養(yǎng)7 d后進行劃痕實驗,觀察各組HDFs在24 h內(nèi)的遷移率;2′,7′二氯熒光素二醋酸(DCFH)法檢測各組培養(yǎng)7 d后細胞內(nèi)活性氧簇(ROS)水平;細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測各組培養(yǎng)7 d后β-半乳糖苷酶活性。體外培養(yǎng)胎盤間充質(zhì)干細胞(placenta mesenchymal stem cells, PMSCs),差速高速離心法分離Exos。將上述培養(yǎng)的HDFs分為3組:HG2組(35 mmol/L葡萄糖)、HG2+低濃度Exos(5μg/mL)組、HG2+高濃度Exos...

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圖1高糖對HDFs增殖的影響

如圖2B所示,培養(yǎng)7d后,與正常對照組相比,HG1組細胞內(nèi)產(chǎn)生ROS水平差異無統(tǒng)計學意義,而HG2組HDFs內(nèi)ROS水平顯著升高(P<0.01),提示35mmol/L的高糖環(huán)境可刺激HDFs細胞內(nèi)的ROS水平升高,從而誘發(fā)細胞衰老。鏡下觀察細胞衰老β半乳糖苷酶染色結(jié)果(圖2D....

圖2高糖對HDFs遷移及衰老的影響

鏡下觀察細胞衰老β半乳糖苷酶染色結(jié)果(圖2D),HG1組HDFs無明顯變化,染色率與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義。但用HG2培養(yǎng)HDFs7d后,細胞逐漸出現(xiàn)老化表現(xiàn),鏡下可見明顯藍綠色細胞染色(P<0.01)。衰老相關(guān)β半乳糖苷酶染色提示35mmol/L的高糖環(huán)境可加速成....

圖3PMSCs及其培養(yǎng)上清液來源Exos鑒定

透射電子顯微鏡下Exos為大小分布均勻的杯狀雙層膜性囊泡(圖3D)。納米顆粒跟蹤分析儀檢測Exos粒徑為(118.9±49.5)nm(圖3E)。Westernblot檢測Exos膜表面標志性蛋白CD9、CD63和CD81表達均呈陽性(圖3F)。Exos內(nèi)化實驗結(jié)果顯示,經(jīng)共聚焦....

圖4Exos對高糖培養(yǎng)的HDFs增殖能力、細胞周期及遷移能力的影響

劃痕實驗結(jié)果顯示(圖4D、E),HG2+低濃度Exos組與未處理組相比,遷移率差異無統(tǒng)計學意義。但HG2+高濃度Exos組的細胞遷移率顯著增加(P<0.01)。細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生量檢測結(jié)果顯示,HG2+低濃度Exos組未能有效抑制細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生。然而HG2+高濃度Exos組可顯....

本文編號：3917713