目的利用飼喂雙鏈RNA(dsRNA)對(duì)家蠅擬除蟲(chóng)菊酯抗性相關(guān)基因CYP6D1的表達(dá)進(jìn)行干擾,并對(duì)干擾效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法化學(xué)合成家蠅CYP6D1基因,連接入載體質(zhì)粒L4440,轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌DH5α擴(kuò)增質(zhì)粒。抽提質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌HT115(DE3),并在異丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下表達(dá)CYP6D1基因的dsRNA。將含有CYP6D1基因dsRNA的HT115(DE3)飼喂家蠅,72 h后通過(guò)熒光相對(duì)定量技術(shù)評(píng)價(jià)家蠅體內(nèi)CYP6D1基因的表達(dá)變化。未進(jìn)行質(zhì)粒L4440轉(zhuǎn)化的大腸埃希菌菌株HT115(DE3)飼喂家蠅作為對(duì)照。結(jié)果采用2^-△△Ct法對(duì)對(duì)照組和處理組的mRNA相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行定量。目的基因和內(nèi)參基因標(biāo)準(zhǔn)曲線R²值均>0.99,擴(kuò)增效率M值均在0.90～1.10之間。與對(duì)照組相比,處理組CYP6D1基因mRNA相對(duì)表達(dá)量下降了40.1%,兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-11.377,P=0.008)。結(jié)論初步建立了飼喂dsRNA對(duì)家蠅擬除蟲(chóng)菊酯抗性基因CYP6D1表達(dá)進(jìn)行干擾的方法,在mRNA水平上實(shí)現(xiàn)基...

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圖1熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

取單只抗性種群家蠅提取總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA模板。按100、10-1、10-2、10-3、10-4進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)♂尯蟮哪０逋ㄟ^(guò)熒光定量PCR擴(kuò)增CYP6D1基因及gapdh基因。根據(jù)所得達(dá)到設(shè)定熒光閾值的循環(huán)數(shù)與稀釋度的常用對(duì)數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果顯示2個(gè)基因標(biāo)準(zhǔn)曲線R2....

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