發(fā)布時間：2024-03-01 18:03

　　目的利用飼喂雙鏈RNA(dsRNA)對家蠅擬除蟲菊酯抗性相關(guān)基因CYP6D1的表達進行干擾,并對干擾效果進行評價。方法化學合成家蠅CYP6D1基因,連接入載體質(zhì)粒L4440,轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌DH5α擴增質(zhì)粒。抽提質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌HT115(DE3),并在異丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導下表達CYP6D1基因的dsRNA。將含有CYP6D1基因dsRNA的HT115(DE3)飼喂家蠅,72 h后通過熒光相對定量技術(shù)評價家蠅體內(nèi)CYP6D1基因的表達變化。未進行質(zhì)粒L4440轉(zhuǎn)化的大腸埃希菌菌株HT115(DE3)飼喂家蠅作為對照。結(jié)果采用2^-△△Ct法對對照組和處理組的mRNA相對表達量進行定量。目的基因和內(nèi)參基因標準曲線R²值均>0.99,擴增效率M值均在0.90～1.10之間。與對照組相比,處理組CYP6D1基因mRNA相對表達量下降了40.1%,兩者之間差異有統(tǒng)計學意義(t=-11.377,P=0.008)。結(jié)論初步建立了飼喂dsRNA對家蠅擬除蟲菊酯抗性基因CYP6D1表達進行干擾的方法,在mRNA水平上實現(xiàn)基...

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圖1熒光定量標準曲線

取單只抗性種群家蠅提取總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA模板。按100、10-1、10-2、10-3、10-4進行梯度稀釋，稀釋后的模板通過熒光定量PCR擴增CYP6D1基因及gapdh基因。根據(jù)所得達到設(shè)定熒光閾值的循環(huán)數(shù)與稀釋度的常用對數(shù)繪制標準曲線，結(jié)果顯示2個基因標準曲線R2....

本文編號：3915610