轉(zhuǎn)化生長因子β (Transforming Growth Factor-β, TGFβ)超家族是一類多功能的細(xì)胞因子,它們在細(xì)胞增殖、分化、凋亡、胚胎發(fā)育和器官形成的過程中起著重要的調(diào)控作用。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone morphogenetic protein, BMP),是TGFβ超家族中的一員,在多細(xì)胞動物中可以廣泛調(diào)控細(xì)胞反應(yīng),包括細(xì)胞與組織的分化、形態(tài)的發(fā)生、四肢的發(fā)育、體軸的形成、原始生殖細(xì)胞的建立以及神經(jīng)管的形成。BMP起始的信號通路的生物活性受到一系列嚴(yán)密的調(diào)控,包括在配體、受體、分泌的拮抗蛋白(如Noggin)和下游細(xì)胞內(nèi)的效應(yīng)蛋白Smad各個層面。Smad是經(jīng)典的TGFβ/BMP信號通路中的核心信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白。在經(jīng)典的BMP信號通路中,配體誘導(dǎo)BMP I型受體對Smad1/5/8的C端SXS位點磷酸化是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵步驟。SXS位點的磷酸化觸發(fā)從細(xì)胞質(zhì)中Smad復(fù)合體的組裝到細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控等一系列細(xì)胞內(nèi)事件。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受到蛋白激酶和磷酸酶動態(tài)的相互調(diào)控,SXS位點也必須被磷酸酶去磷酸化以維持Smad信號通路活性和功能的平衡。本研究中,我們試圖解決的一個關(guān)鍵問題就是S...

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圖１．１?ＰＰＭＩＡ敲減增加了?Ｓｍａｄｌ的核內(nèi)聚集

ＰＰＭ１Ａ的敲除導(dǎo)致了?Ｐ－Ｓｍａｄｌ蛋白水平下降趨勢變緩，然而，仍然能看到了明顯??的下降趨勢。此過程中，Ｓｍａｄｌ總蛋白幾乎沒有變化，說明Ｐ－Ｓｍａｄｌ水平的降低??是緣于Ｓｍａｄｌ蛋白的去雖酸化而非總蛋白量的減少（圖１．２Ａ）。我們將Ｗｅｓｔｅｒｎ??Ｂｌｏｔｔｉｎｇ結(jié)果用....

圖１．３?ＳＣＰ４和ＰＰＭＩＡ敲減對Ｐ－Ｓｍａｄｌ蛋白水平表現(xiàn)為共同促進作用??細(xì)，?ｎ

■■■??ｒ＂■園團??圖１．１?ＰＰＭＩＡ敲減增加了?Ｓｍａｄｌ的核內(nèi)聚集。??穩(wěn)定敲減細(xì)胞系Ｃ２Ｃ１２－ｓｈＰＰＭｌＡ或者對照Ｃ２Ｃ１２－ｓｈＣｏｎ比〇１用ＢＭＰ２?（１００?ｎｇ／ｍｌ）處理半小時，??洗去ＢＭＰ２并用ＤＭ刺激３０分鐘。用Ｓｍａｄｌ抗體進行免《巧光，ＤＡＰＩ....

圖１．４?ＳＣＰ４去攝暖化Ｓｍａｄｌ??ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞轉(zhuǎn)染Ｍｙｃ－Ｓｍａｄｌ和ＦＬＡＧ－化ｇ的褚酸酶，為了激活Ｓｍａｄｌ的礎(chǔ)酸化，共轉(zhuǎn)入??

第一部分??Ｉ．４，泳道３）。這與之前的文獻報道相符（３５）。ＦＬＡＧ－ＳＣＰ４同樣展示出降低Ｐ－Ｓｍａｄｌ??水平的能力（圖１．４，泳道６）。然而，作為陰性對照的ＦＬＡＧ－ＰＰＭ１Ｄ和ＦＬＡＧ－ＳＣＰ１??沒有表現(xiàn)出可探測到的Ｓｍａｄｌ磯酸化改變（圖１．４，沫道４和５）。??Ｍ....

圖１．５?ＳＣＰ４去雜酸化ＳｍａｄＳ??Ｔ細(xì)ＨＡ－ｍａ５ＦＡ－化，ａ５，??

?＜ＷＭＭｐ｜－ＰＰＰ１ＣＡ??１２?３?４??圖１．６?ＳＣＰ４去雜酸化ＳｍａｄＳ??ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞轉(zhuǎn)染ＨＡ－Ｓｍａｄ５和ＦＬＡＧ－ｔａｇ的礎(chǔ)酸酶，為了激活ＳｍａｄＳ的堵酸化，共轉(zhuǎn)入ＡＬＫ３??（Ｑ２３犯），收集細(xì)胞用相應(yīng)抗體進行Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｉｏ扣ｎｇ檢測。??ＳＣＰ....

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