目的制備E7_49-57表位嵌合病毒樣顆粒,并進(jìn)行免疫原性分析。方法利用分子模擬軟件Discovery Studio預(yù)測(cè)HPV16 L1的E7_49-57最佳嵌合位點(diǎn),將E7_49-57表位嵌入預(yù)測(cè)位點(diǎn)。構(gòu)建pET28a-16L1-E7_49-57重組質(zhì)粒,于大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)HPV16L1-E7_49-57蛋白并利用鎳柱進(jìn)行親和層析純化。于體外重組VLPs后,進(jìn)行動(dòng)態(tài)光散射粒徑和透射電鏡分析。用E7_49-57嵌合VLPs免疫小鼠,假病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)免疫血清中和抗體滴度。流式多因子法檢測(cè)Th1和Th2型細(xì)胞因子水平。結(jié)果 HI loop區(qū)355/356為最佳表位嵌合位點(diǎn)。正確表達(dá)了HPV16 L1-E7_49-57蛋白并組裝E7_49-57嵌合VLPs。E7_49-57嵌合VLPs免疫小鼠3次后,小鼠血清中和抗體滴度log10平均值達(dá)到4.23,略低于野生型VLPs(log10平均值為4.45)。但是,相對(duì)...

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圖1最佳嵌合位點(diǎn)預(yù)測(cè)

收集重組菌誘導(dǎo)表達(dá)后的上清液,經(jīng)鎳柱HisTrapFF親和層析,收集洗脫流分。SDS-PAGE電泳(圖5),結(jié)果顯示經(jīng)鎳柱純化后得到較高純度目的蛋白。蛋白免疫印跡(Westernblot)(圖6)顯示在55kD處出現(xiàn)目的斑帶,證明目的蛋白表達(dá)正確。圖2pET28a-16....

圖2pET28a-16L1-E749-57重組質(zhì)粒PCR鑒定

圖1最佳嵌合位點(diǎn)預(yù)測(cè)圖3HPV16L1-E749-57蛋白表達(dá)的SDS-PAGE分析

圖3HPV16L1-E749-57蛋白表達(dá)的SDS-PAGE分析

圖2pET28a-16L1-E749-57重組質(zhì)粒PCR鑒定圖4HPV16L1-E749-57蛋白可溶性鑒定

圖4HPV16L1-E749-57蛋白可溶性鑒定

圖3HPV16L1-E749-57蛋白表達(dá)的SDS-PAGE分析圖5HPV16L1-E749-57蛋白純化的SDS-PAGE分析

本文編號(hào)：4001589