目的制備E7_49-57表位嵌合病毒樣顆粒,并進行免疫原性分析。方法利用分子模擬軟件Discovery Studio預測HPV16 L1的E7_49-57最佳嵌合位點,將E7_49-57表位嵌入預測位點。構建pET28a-16L1-E7_49-57重組質粒,于大腸桿菌中誘導表達HPV16L1-E7_49-57蛋白并利用鎳柱進行親和層析純化。于體外重組VLPs后,進行動態(tài)光散射粒徑和透射電鏡分析。用E7_49-57嵌合VLPs免疫小鼠,假病毒中和試驗檢測免疫血清中和抗體滴度。流式多因子法檢測Th1和Th2型細胞因子水平。結果 HI loop區(qū)355/356為最佳表位嵌合位點。正確表達了HPV16 L1-E7_49-57蛋白并組裝E7_49-57嵌合VLPs。E7_49-57嵌合VLPs免疫小鼠3次后,小鼠血清中和抗體滴度log10平均值達到4.23,略低于野生型VLPs(log10平均值為4.45)。但是,相對...

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圖1最佳嵌合位點預測

收集重組菌誘導表達后的上清液,經(jīng)鎳柱HisTrapFF親和層析,收集洗脫流分。SDS-PAGE電泳(圖5),結果顯示經(jīng)鎳柱純化后得到較高純度目的蛋白。蛋白免疫印跡(Westernblot)(圖6)顯示在55kD處出現(xiàn)目的斑帶,證明目的蛋白表達正確。圖2pET28a-16....

圖2pET28a-16L1-E749-57重組質粒PCR鑒定

圖1最佳嵌合位點預測圖3HPV16L1-E749-57蛋白表達的SDS-PAGE分析

圖3HPV16L1-E749-57蛋白表達的SDS-PAGE分析

圖2pET28a-16L1-E749-57重組質粒PCR鑒定圖4HPV16L1-E749-57蛋白可溶性鑒定

圖4HPV16L1-E749-57蛋白可溶性鑒定

圖3HPV16L1-E749-57蛋白表達的SDS-PAGE分析圖5HPV16L1-E749-57蛋白純化的SDS-PAGE分析

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