該研究明確了不同培養(yǎng)代次經血源子宮內膜干細胞(menstrual blood derived endometrial stem cells,MenSCs)的生物學活性差異,為深入研究MenSCs生物學特性及其潛在臨床應用提供理論支持。該研究使用鈣黃綠素AM(Calcein-AM)染色檢測體外培養(yǎng)至第三代(passage 3,P3)、P9和P15代MenSCs的形態(tài);β-半乳糖苷酶染色檢測不同培養(yǎng)代次MenSCs的衰老程度;活性氧試劑盒檢測不同培養(yǎng)代次MenSCs中活性氧的變化;隨后利用MTT、流式細胞術及細胞活死染色在接觸式共培養(yǎng)條件下檢測P3、P9和P15代MenSCs對小鼠脾淋巴細胞活性、細胞周期、死亡情況以及脾臟淋巴細胞中CD3⁺和CD19⁺淋巴細胞比例的影響。結果表明,隨著培養(yǎng)代次的增加MenSCs細胞面積顯著增大,在培養(yǎng)至P15代時MenSCs開始出現大量絲狀偽足。衰老程度及活性氧的含量也隨培養(yǎng)代次的增加而顯著升高;隨后與MenSCs接觸式共培養(yǎng)體顯著增加了小鼠脾淋巴細胞的活性,降低淋巴細胞死亡率,且隨培養(yǎng)代次的增加,MenSCs對...

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【部分圖文】：

圖1不同體外培養(yǎng)代次MenSCs生物學活性差異

本研究發(fā)現,體外長期傳代培養(yǎng)對MenSCs的細胞形態(tài)具有顯著影響,培養(yǎng)高代次的MenSCs細胞面積顯著大于低代次MenSCs,而細胞面積增大與細胞衰老程度呈正相關。隨后,β-半乳糖苷酶染色也進一步驗證了高代次MenSCs中存在更多衰老細胞,而形態(tài)觀察亦發(fā)現,P15代M....

圖2MenSCs共培養(yǎng)促進小鼠脾淋巴細胞存活

圖1不同體外培養(yǎng)代次MenSCs生物學活性差異圖3MenSCs共培養(yǎng)對小鼠脾淋巴細胞增殖無明顯影響,但可顯著抑制細胞碎片的產生

圖3MenSCs共培養(yǎng)對小鼠脾淋巴細胞增殖無明顯影響,但可顯著抑制細胞碎片的產生

圖2MenSCs共培養(yǎng)促進小鼠脾淋巴細胞存活綜上所述,MenSCs隨體外培養(yǎng)時間和傳代次數的增加,出現明顯的生物學活性降低等特征,且對淋巴細胞的調節(jié)能力顯著下降,因此為提供高質量MenSCs,應選擇低代次MenSCs,建議使用P3至P6代MenSCs,保證細胞....

圖4MenSCs共培養(yǎng)對小鼠脾臟CD3+和CD19+淋巴細胞無明顯活化作用

綜上所述,MenSCs隨體外培養(yǎng)時間和傳代次數的增加,出現明顯的生物學活性降低等特征,且對淋巴細胞的調節(jié)能力顯著下降,因此為提供高質量MenSCs,應選擇低代次MenSCs,建議使用P3至P6代MenSCs,保證細胞數量的同時保障細胞質量,最終確保穩(wěn)定的臨床治療效....

本文編號：3890751