研究背景細(xì)胞-細(xì)胞融合對(duì)于多細(xì)胞生物的發(fā)育至關(guān)重要。骨骼肌是由許多肌纖維組成的獨(dú)特組織,每個(gè)肌纖維都是由成百上千個(gè)成肌細(xì)胞相互融合的產(chǎn)物。成肌細(xì)胞融合不僅對(duì)胚胎發(fā)育過(guò)程中骨骼肌形成至關(guān)重要,而且對(duì)成人肌衛(wèi)星細(xì)胞介導(dǎo)的肌肉再生也至關(guān)重要。為了發(fā)生成肌細(xì)胞融合,兩個(gè)融合伴侶必須相互識(shí)別粘附其質(zhì)膜,打開(kāi)融合孔以允許細(xì)胞中的物質(zhì)相互交換,并最終合并成一個(gè)細(xì)胞。在果蠅胚胎中,有兩種不同類型的成肌細(xì)胞,肌肉創(chuàng)始細(xì)胞(founder cells,FCs)和融合感受態(tài)成肌細(xì)胞(fusion competent myoblasts,FCMs),FCs和FCMs膜表面表達(dá)的不同蛋白之間相互作用,促成它們相互識(shí)別和粘附。在FCs中,兩個(gè)旁系同源物Dumbfounded(Duf)亦被稱為Kin-of-Irre(Kirre)和Roughest(Rst)亦被稱為Irre C,在成肌細(xì)胞融合過(guò)程中具有多種功能。在FCMs中,Sticks and stones(Sns)作為主要胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs),其功能部分由其旁系同源物Hibris(Hbs)補(bǔ)償。類似胚胎肌肉的發(fā)育...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
前言
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 骨骼肌
        1.1.1 骨骼肌在哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育中形成過(guò)程
        1.1.2 骨骼肌損傷后的重建過(guò)程
    1.2 成肌細(xì)胞及成肌細(xì)胞融合過(guò)程
    1.3 Nephrin蛋白在骨骼肌形成及重建過(guò)程中作用的研究
    1.4 Kirrel蛋白在骨骼肌形成及重建過(guò)程中作用的研究
    1.5 Nephrin蛋白和Kirrel蛋白的交聯(lián)作用研究進(jìn)展
    1.6 本研究的立題依據(jù)與研究?jī)?nèi)容
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞和動(dòng)物
        2.1.2 質(zhì)粒和菌株
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑
        2.2.2 Western Blot相關(guān)試劑
        2.2.3 RNA提取及RT-PCR相關(guān)試劑
        2.2.4 其他相關(guān)試劑
        2.2.5 主要試劑配制方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.2 細(xì)菌轉(zhuǎn)化
        2.4.3 質(zhì)粒小提
        2.4.4 轉(zhuǎn)染
        2.4.5 免疫熒光染色
        2.4.6 RNA提取
        2.4.7 逆轉(zhuǎn)錄
        2.4.8 RT-PCR
        2.4.9 Western Blot
        2.4.10 小鼠肌肉損傷模型建立
    2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第3章 結(jié)果
    3.1 Kirrel A和Kirrel B在C2C12細(xì)胞融合和小鼠骨骼肌損傷修復(fù)過(guò)程中m RNA的表達(dá)
        3.1.1 半定量RT-PCR和RT-q PCR檢測(cè)Kirrel A和Kirrel B在C2C12細(xì)胞分化融合過(guò)程中的m RNA的表達(dá)變化
        3.1.2 半定量RT-PCR和RT-q PCR檢測(cè)Kirrel A和Kirrel B在小鼠肌肉損傷后重建過(guò)程中m RNA的表達(dá)變化
    3.2 建立C2C12：Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系
        3.2.1 Western Blot在蛋白水平上檢測(cè)Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1- sh RNA在細(xì)胞系中敲低效果
        3.2.2 半定量RT-PCR和RT-q PCR在m RNA水平上檢測(cè)Kirrel A-、                Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA在C2C12細(xì)胞系中敲低Kirrel A和Kirrel B效果
    3.3 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)myosin蛋白探究敲低Kirrel1、Kirrel A、Kirrel B對(duì)C2C12細(xì)胞分化融合的影響
        3.3.1 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)敲低Kirrel1對(duì)C2C12細(xì)胞分化融合的影響
        3.3.2 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)敲低Kirrel A對(duì)C2C12細(xì)胞分化融合的影響
        3.3.3 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)敲低Kirrel B對(duì)C2C12細(xì)胞分化融合的影響
    3.4 Western Blot檢測(cè)myogenin和myosin蛋白探究敲低Kirrel1、Kirrel A、Kirrel B對(duì)C2C12細(xì)胞分化融合的影響
        3.4.1 Western Blot檢測(cè)敲低Kirrel1、Kirrel A對(duì)C2C12細(xì)胞分化融合的影響
        3.4.2 Western Blot檢測(cè)敲低Kirrel B對(duì)C2C12細(xì)胞分化融合的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：3869766