篩選樹鼩真菌性角膜炎發(fā)病過程中差異表達的微小RNA(microRNA,miRNA)和信使RNA(mRNA),分析其靶基因的生物學(xué)功能及信號通路,為闡明真菌性角膜炎的免疫機制及篩選其抗真菌治療的潛在靶點提供線索。通過茄病鐮刀菌液顯微注射至樹鼩角膜基質(zhì),誘導(dǎo)真菌性角膜炎的發(fā)生;使用高通量測序技術(shù)檢測茄病鐮刀菌感染樹鼩第7天、14天和30天的角膜組織miRNA和mRNA表達譜,以自身未感染的眼角膜為對照;差異表達miRNAs的靶基因與差異表達mRNAs取交集構(gòu)建miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò),采用實時熒光定量PCR進行驗證;最后對靶基因進行GO和KEGG富集分析。結(jié)果表明:在茄病鐮刀菌感染樹鼩角膜第7天、14天和30天,分別有78、56、41個mRNAs和70、63、20個miRNAs顯著性差異表達,其中有29個mRNAs和14個miRNAs在感染第7天、14天和30天均顯著性差異表達,Has-miR-214-3p和Has-miR-149-5p處于調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵節(jié)點。GO和KEGG富集分析發(fā)現(xiàn),顯著性差異表達的mRNAs和miRNAs靶基因主要參與免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng),涉及Toll-like受體...

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗動物
    1.2 茄病鐮刀菌
    1.3 實驗方法
        1.3.1 樹鼩真菌性角膜炎模型的建立
        1.3.2 角膜組織總RNA提取
        1.3.3 文庫構(gòu)建及測序
        1.3.4 RNA測序數(shù)據(jù)輸出與過濾
        1.3.5 篩選差異表達miRNAs和mRNAs
        1.3.6 miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
        1.3.7 實時熒光定量PCR(qPCR)驗證miRNA的表達水平
        1.3.8 miRNA靶基因預(yù)測及富集分析
    1.4 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果
    2.1 樹鼩真菌感染角膜的癥狀及病理學(xué)特征
    2.2 RNA測序數(shù)據(jù)特征
    2.3 差異表達miRNAs和mRNAs分析
    2.4 構(gòu)建的miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
    2.5 qPCR驗證miRNA表達水平
    2.6 miRNA靶基因GO功能和KEGG信號通路富集分析
3 討論
4 結(jié)論



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