目的本研究主要探討微管切割蛋白Spastin如何調(diào)控AMPA受體GluA1亞基的內(nèi)化。材料與方法首先我們構建了Spastin及其截短片段的各種表達載體,用pull down和Co-IP的實驗方法,明確Spastin和GluA1存在相互作用及其具體結(jié)合部位;然后在海馬神經(jīng)元中觀察Spastin和GluA1在神經(jīng)元中樹突及樹突棘的共定位情況;接下來在GluA1-HEK293T穩(wěn)定細胞株及海馬神經(jīng)中過表達Spastin WT,通過免疫熒光以及提取細胞膜蛋白觀察Total GluA1和Surface GluA1的表達變化,并用全細胞膜片鉗記錄AMPA電流和mEPSC的變化;最后構建Spastin功能域的真核表達突變體,在穩(wěn)定細胞株和海馬神經(jīng)元中過表達,明確Spastin WT及其各功能域?qū)luA1的具體影響。結(jié)果1)通過pull down和Co-IP實驗中明確Spastin與GluA1存在相互作用,且作用部位位于Spastin的MIT功能域和GluA1的C末端;2)GluA1-HEK293T穩(wěn)定細胞株及神經(jīng)元中過表達Spastin WT,可抑制細胞膜GluA1的表達;3)Spastin WT...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
    1.1 神經(jīng)元的突觸傳遞
    1.2 樹突棘
        1.2.1 突觸的信息傳遞與樹突棘的關系
        1.2.2 樹突棘與AMPA受體的關系
    1.3 AMPA受體
        1.3.1 AMPA受體的組成
        1.3.2 AMPA受體轉(zhuǎn)運
    1.4 Spastin
        1.4.1 Spastin的概述
        1.4.2 Spastin的微管切割功能
        1.4.3 Spastin與膜轉(zhuǎn)運
    1.5 研究目的和意義
材料和方法
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
    2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
實驗結(jié)果
    3.1 Spastin與GluA1存在相互作用
    3.2 明確Spastin與GluA1的結(jié)合部位
    3.3 穩(wěn)定細胞株過表達Spastin WT促進GluA1內(nèi)化
    3.4 神經(jīng)元過表達Spastin WT促進GluA1內(nèi)化
    3.5 Spastin的功能域與切割功能
    3.6 穩(wěn)定株中切割功能和MIT共同促進GluA1內(nèi)化
    3.7 神經(jīng)元中切割功能和MIT共同促進GluA1內(nèi)化
討論
    4.1 Spastin與GluA1的相互作用
    4.2 Spastin促進GluA1內(nèi)化
    4.3 Spastin與微管切割
    4.4 Spastin的切割功能及MIT區(qū)促進GluA1內(nèi)化
結(jié)論
參考文獻
主要中英文縮略詞
在讀期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3853654