神經(jīng)干細(xì)胞是一類具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞。在特定的條件下能夠分化成神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞,從而參與神經(jīng)發(fā)生和損傷修復(fù)。通常情況下,成體神經(jīng)干細(xì)胞大多數(shù)處于靜息狀態(tài)。在病理狀況下,這些靜息態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞可以被激活,經(jīng)增殖、遷移和分化,從而在損傷的部位進(jìn)行神經(jīng)元的再生和環(huán)路重建。目前神經(jīng)干細(xì)胞主要分布在側(cè)腦室的室管膜區(qū)域和海馬齒狀回顆粒下層。我們在成年小鼠的非神經(jīng)源性區(qū)域“第四腦室室管膜區(qū)”發(fā)現(xiàn)存在靜息態(tài)的CD133+神經(jīng)干細(xì)胞。因此,研究第四腦室靜息態(tài)神經(jīng)干細(xì)胞及由神經(jīng)干細(xì)胞形成的神經(jīng)發(fā)生現(xiàn)象,對于進(jìn)一步了解大腦功能、神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、神經(jīng)疾病的發(fā)病機(jī)理以及內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞對中樞神經(jīng)系的損傷修復(fù)等都具有重要的意義。本文以示蹤小鼠CD133-CreERT2:R26R-Rosa26-CAG-LSL-z SGreen為實(shí)驗(yàn)材料,通過對靜息態(tài)的CD133神經(jīng)干細(xì)胞的示蹤來探究小鼠第四腦室中的神經(jīng)發(fā)生以及損傷后神經(jīng)干細(xì)胞的激活和血管系統(tǒng)的再生。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在正常的生理狀況下,第四腦室周圍存在著各種類型的神經(jīng)細(xì)胞,說明正常情況下第四腦室的神經(jīng)發(fā)生維持著正常的生理功能。通過立體定位...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 神經(jīng)干細(xì)胞簡介
    1.2 成年哺乳動(dòng)物大腦中靜息態(tài)和激活態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞
        1.2.1 海馬中靜息態(tài)和激活態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞
        1.2.2 側(cè)腦室室管膜下區(qū)中靜息態(tài)和激活態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞
        1.2.3 嗅球上皮中靜息態(tài)和激活態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞
        1.2.4 第四腦室中靜息態(tài)和激活態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞
    1.3 靜息態(tài)神經(jīng)干細(xì)胞激活的調(diào)控
        1.3.1 腫瘤基因?qū)SC激活的調(diào)控
        1.3.2 表觀遺傳修飾對NSC激活的調(diào)節(jié)
        1.3.3 微環(huán)境對NSCs激活的影響
    1.4 CD133簡介
        1.4.1 CD133、AC133和Prominin1的來源
        1.4.2 CD133的結(jié)構(gòu)
        1.4.3 CD133的功能
    1.5 Cre/loxP重組系統(tǒng)
        1.5.1 Cre/loxP系統(tǒng)的基本原理
        1.5.2 Cre/loxP系統(tǒng)誘導(dǎo)基因重組的方式
        1.5.3 Cre/loxP系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)
        1.5.4 他莫昔芬誘導(dǎo)Cre/loxP系統(tǒng)基因敲出
    1.6 腦損傷
    1.7 本文研究意義
第2章 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與試劑耗材
    2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.2 試劑耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)抗體信息
    2.4 引物信息
    2.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
第3章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 小鼠基因型鑒定
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 PCR鑒定基因型
    3.2 CD133-CreERT2:R26R-zSGreen小鼠注射Tamoxifen
        3.2.1 主要試劑和耗材
        3.2.2 配制10mg/mlTamoxifen溶液
        3.2.3 CD133-CreERT2:R26R-zSGreen小鼠注射Tamoxifen
    3.3 小鼠灌注取腦
        3.3.1 主要試劑、器械和耗材
        3.3.2 小鼠心臟灌注
        3.3.3 小鼠大腦取材
    3.4 立體定位損傷
        3.4.1 主要試劑、器械和儀器
        3.4.2 配制麻藥三溴乙醇
        3.4.3 小鼠第四腦室立體定位
        3.4.4 小鼠自體取血注射
    3.5 組織冰凍切片
        3.5.1 主要器材
        3.5.2 冰凍切片機(jī)的使用
    3.6 組織免疫熒光
        3.6.1 主要器材和試劑
        3.6.2 試劑配制
        3.6.3 組織免疫熒光步驟
    3.7 共聚焦顯微鏡成像
        3.7.1 激光共聚焦顯微鏡(LeicaTCSSP5II)使用說明
        3.7.2 激光共聚焦顯微鏡(NikonA1R)使用說明
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 小鼠基因型鑒定結(jié)果
        4.1.1 純合CD133-CreERT2小鼠鑒定結(jié)果
        4.1.2 純合Rosa26-CAG-LSL-zSGreen小鼠鑒定結(jié)果
    4.2 生理狀況下第四腦室存在的細(xì)胞類型
        4.2.1 生理狀況下第四腦室存在著CD133+的神經(jīng)干細(xì)胞
        4.2.2 生理狀況下第四腦室存在著星形膠質(zhì)細(xì)胞
        4.2.3 生理狀況下第四腦室存在著CD133+/GFAP+B細(xì)胞
        4.2.4 生理狀況下第四腦室存在著Nestin+的神經(jīng)干細(xì)胞
        4.2.5 生理狀況下第四腦室存在著神經(jīng)元
        4.2.6 生理狀況下第四腦室存在著少突膠質(zhì)細(xì)胞
    4.3 生理狀況下第四腦室CD133+神經(jīng)干細(xì)胞的分布
        4.3.1 第四腦室CD133+神經(jīng)干細(xì)胞分布
    4.4 示蹤小鼠注射Tamoxifen后最佳收獲時(shí)間的探究
        4.4.1 示蹤小鼠注射Tamoxifen后不同時(shí)間免疫熒光結(jié)果
        4.4.2 示蹤小鼠注射Tamoxifen后不同時(shí)間zSGreen統(tǒng)計(jì)分析
    4.5 第四腦室的損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        4.5.1 損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)圖
    4.6 第四腦室損傷模型的建立
        4.6.1 第四腦室損傷模型示意圖
        4.6.2 第四腦室損傷后的細(xì)胞變化
    4.7 第四腦室中CD133+神經(jīng)干細(xì)胞對損傷的修復(fù)
        4.7.1 第四腦室損傷后不同時(shí)間點(diǎn)CD133的表達(dá)
        4.7.2 第四腦室損傷后不同時(shí)間點(diǎn)GFAP的表達(dá)
        4.7.3 第四腦室損傷后血管內(nèi)皮細(xì)胞的變化
        4.7.4 第四腦室損傷后血管系統(tǒng)干性細(xì)胞的修復(fù)
第5章 結(jié)論與討論
    5.1 結(jié)論
    5.2 討論
致謝
參考文獻(xiàn)



本文編號：3845285