目的建立重組金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)疫苗特異性人血清IgG抗體的Luminex系統(tǒng)多重檢測(cè)方法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法以重組SA疫苗所含的5種抗原(mHla、IsdB-N2、SpA5、mSEB、MntC)作為磁珠偶聯(lián)蛋白,分別與相應(yīng)磁珠偶聯(lián),加入?yún)⒖佳?第3次免疫重組SA疫苗后21 d的志愿者血清,篩選出抗5種抗原特異性高效價(jià)血清8份,混合),37℃孵育;加入山羊F(ab′)2抗人IgG-Fc(PE),37℃孵育;用Luminex系統(tǒng)進(jìn)行多重檢測(cè),并對(duì)偶聯(lián)抗原濃度、孵育時(shí)間、二抗稀釋度進(jìn)行優(yōu)化。同時(shí)分析5種抗原間的干擾情況,并驗(yàn)證方法學(xué)的特異性、準(zhǔn)確性及精密性。結(jié)果 mHla、IsdB-N2、SpA5、mSEB、MntC最適偶聯(lián)濃度分別為30、150、7.5、2.5、7.5μg/2.5 mil,最適一抗及二抗孵育時(shí)間均為30 min,最適二抗稀釋度為1∶5 000。5種抗原間不存在明顯的交叉表位,與特異的抗體反應(yīng)過(guò)程無(wú)明顯相互干擾。游離的重組蛋白對(duì)偶聯(lián)抗原與抗體間反應(yīng)的抑制率隨著濃度的增加而增加,3種濃度的參考血清的回收率介于87.0%～120.8...

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 參考血清
    1.2 包被抗原
    1.3 主要試劑及儀器
    1.4 方法的建立
    1.5 方法的優(yōu)化
        1.5.1 偶聯(lián)抗原濃度
        1.5.2 孵育時(shí)間
        1.5.3 二抗稀釋度
    1.6 多重檢測(cè)抗原間干擾試驗(yàn)
    1.7 方法的驗(yàn)證
        1.7.1 特異性
        1.7.2 準(zhǔn)確性
        1.7.3 精密性
    1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 方法的優(yōu)化結(jié)果
        2.1.1 最適偶聯(lián)抗原濃度
        2.1.2 最適孵育時(shí)間
        2.1.3 最適二抗稀釋度
    2.2 多重檢測(cè)抗原間干擾分析
    2.3 方法的驗(yàn)證
        2.3.1 特異性
        2.3.2 準(zhǔn)確性
        2.3.3 精密性
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