目的:探究利用羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(CFSE)進(jìn)行衰老細(xì)胞分選的可行性。方法:利用CDK4/6抑制劑LY2835219誘導(dǎo)人口腔鱗癌細(xì)胞Cal27衰老,在LY2835219撤藥后立即進(jìn)行CFSE染色,避光培養(yǎng),并在撤藥后第0、2、4、6、8天進(jìn)行衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色。通過流式細(xì)胞儀分選CFSE熒光強(qiáng)度高的細(xì)胞,進(jìn)行SA-β-gal染色。結(jié)果:CFSE熒光標(biāo)記的細(xì)胞與SA-β-gal染色陽性的細(xì)胞相一致。撤藥后第4、6天利用CFSE熒光進(jìn)行流式分選,CFSE-high組的細(xì)胞SA-β-gal陽性率顯著高于未分選組(P<0.05)。結(jié)論:利用CFSE分選衰老細(xì)胞具有可行性,可獲得活的衰老細(xì)胞。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞和主要試劑
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 細(xì)胞衰老誘導(dǎo)
        1.2.3 SA-β-gal染色
        1.2.4 CFSE熒光染色
        1.2.5 SA-β-gal與CFSE雙染
        1.2.6 Western blot
        1.2.7 流式細(xì)胞分析及分選
    1.3 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 LY2835219成功誘導(dǎo)Cal27細(xì)胞衰老
    2.2 CFSE熒光與SA-β-gal染色的一致性
    2.3 利用CFSE分選衰老細(xì)胞
3 討論



本文編號：3820368