目的:探究丹皮酚對干眼引起的眼表損傷的療效及其相關(guān)作用機制。方法:本實驗通過皮下注射東莨膽堿聯(lián)合干燥環(huán)境建立干眼動物模型。將實驗小鼠分為正常對照組、干眼組、溶劑對照組以及丹皮酚溶液組四個組別(每組老鼠5-7只),前期分別設置1%、5%、10%三個不同濃度梯度的丹皮酚溶液組別,造模5天后,使用酚紅棉線法測量基礎淚液分泌量;俄勒岡綠染料(Oregon green dextran,OGD)熒光染色檢測角膜上皮缺損程度;過碘酸-希夫(Periodic acid-Schiff,PAS)染色檢測小鼠結(jié)膜杯狀細胞數(shù)量;免疫熒光染色檢測角膜上皮屏障功能相關(guān)指標(基質(zhì)金屬蛋白酶-3、9:MMP-3、MMP-9);免疫熒光染色和western blot檢測角膜和結(jié)膜上皮凋亡標志物(Caspase-3、Caspase-8、TUNEL);免疫組織化學染色檢測結(jié)膜中CD4陽性T細胞的浸潤;qRT-PCR和Elisa方法檢測小鼠結(jié)膜中炎癥因子的表達水平。最后使用western blot檢測小鼠結(jié)膜中活化的NF-κB蛋白表達變化。結(jié)果:丹皮酚溶液滴眼5天可以增加小鼠的淚液分泌量、減少結(jié)膜杯狀細胞的丟失并改善角膜上皮...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 干眼
        1.1.1 干眼的定義與流行病學
        1.1.2 干眼涉及的淚膜功能單位的組織解剖
        1.1.3 干眼的病理生理機制
        1.1.4 干眼的動物模型
        1.1.5 干眼的抗炎治療
    1.2 丹皮酚
        1.2.1 丹皮酚概述
        1.2.2 丹皮酚的藥理作用及其相關(guān)機制
    1.3 干眼中的炎癥信號通路
        1.3.1 眼表炎癥相關(guān)信號通路
        1.3.2 NF-κB信號通路
        1.3.3 NF-κB信號通路與細胞凋亡
第二章 實驗材料
    2.1 實驗動物
    2.2 實驗藥物
    2.3 實驗試劑
        2.3.1 主要試劑配制
        2.3.2 主要實驗試劑及耗材
    2.4 實驗儀器及設備
第三章 實驗方法
    3.1 小鼠干眼動物模型建立及分組
    3.2 基礎淚液分泌量測定
    3.3 OGD熒光染色
    3.4 石蠟切片及相關(guān)染色
        3.4.1 石蠟標本制備
        3.4.2 石蠟切片
        3.4.3 PAS染色
        3.4.4 原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)(TUNEL染色)
    3.5 冰凍切片及免疫熒光染色
        3.5.1 冰凍切片
        3.5.2 免疫熒光染色
        3.5.3 CD4免疫組織化學染色
    3.6 實時熒光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)
        3.6.1 小鼠角膜總RNA提取
        3.6.2 RNA濃度和純度測定(分光光度計)
        3.6.3 逆轉(zhuǎn)錄
        3.6.4 Real-time PCR
        3.6.5 數(shù)據(jù)分析
    3.7 炎癥因子蛋白質(zhì)水平檢測(ELISA法)
    3.8 Westert blot免疫印跡分析
        3.8.1 蛋白提取及定量
        3.8.2 Western blot免疫印跡分析
    3.9 統(tǒng)計分析
第四章 實驗結(jié)果
    4.1 基礎淚液分泌量測定實驗結(jié)果
    4.2 眼表OGD染色結(jié)果
    4.3 小鼠結(jié)膜杯狀細胞數(shù)量的變化
    4.4 角膜上皮屏障功能檢測結(jié)果
    4.5 角結(jié)膜組織中Caspase表達情況
    4.6 角結(jié)膜組織中TUNEL染色情況
    4.7 結(jié)膜CD4染色情況
    4.8 結(jié)膜組織中炎癥因子的表達情況
    4.9 丹皮酚的抗炎機制探究
第五章 討論
第六章 結(jié)論
附錄 中英文對照表
參考文獻
致謝
在學期間主要科研成果



本文編號：3816412