目的了解小鼠出生后成纖維細(xì)胞激活蛋白(Fap)蛋白在心臟組織中的表達(dá)情況以及對其內(nèi)肽酶活性進(jìn)行測定。方法將1天、4天、7天、14天、21天、2月齡C57小鼠心肌組織進(jìn)行取材,提取RNA和蛋白質(zhì),通過qPCR和Western blot方法檢測Fap表達(dá);分別通過RIPA裂解法、PBS研磨法和膜蛋白提取試劑盒提取小鼠心臟組織蛋白,測定Fap蛋白內(nèi)肽酶活性曲線。結(jié)果生理情況下Fap在出生后的發(fā)育過程中蛋白表達(dá)逐漸升高,離乳后到成年期達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài);通過三種提取蛋白方法得到的酶活力曲線,確定三種蛋白提取方法對Fap蛋白內(nèi)肽酶活性的測定無明顯差異。結(jié)論在小鼠出生后Fap蛋白在心肌組織中表達(dá)量不斷升高并在離乳后保持穩(wěn)定;Fap內(nèi)肽酶活性不受蛋白提取方法的影響,提示Fap的內(nèi)肽酶活性中心很穩(wěn)定。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 小鼠
    1.2 qRT-PCR
    1.3 蛋白提取
    1.4 Western blot
    1.5 酶活性檢測
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 心臟組織中Fap蛋白表達(dá)量時程變化
    2.2 Fap蛋白內(nèi)肽酶酶活曲線測定
3 討論



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