目的構(gòu)建Ipr1/PPE68重組卡介苗(Recombinant BCG,rBCG),探討其誘導BALB/C小鼠免疫應答的效果。方法將Ipr1和PPE68基因及結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)復制子OriM分別插入pBudCE4.1的多克隆位點,構(gòu)建共表達穿梭質(zhì)粒pBIPO,將其電轉(zhuǎn)入BCG,構(gòu)建Ipr1/PPE68-rBCG并將rBCG免疫BALB/C小鼠,檢測小鼠血清中IgG2a、IL-12、IFN-γ及IL-4的水平、特異性脾淋巴細胞增殖和CD4+和CD8+T細胞數(shù)量,同時觀察脾、肺荷菌量及脾、肺組織病理學變化。結(jié)果酶切測序及菌落PCR鑒定Ipr1和PPE68以及OriM基因序列與理論值相符,Western-blotting結(jié)果顯示Ipr1和PPE68蛋白成功表達。Ipr1/PPE68-rBCG免疫小鼠后,血清中的IgG2a和IL-12水平及脾淋巴細胞增殖情況明顯高于對照組,但與BCG組相比沒有顯著意義;IFN-γ水平顯著低于BCG組,與對照組相比無顯著性差異;各組別IL-4的水平差異均不明顯。脾、肺荷菌實驗未見菌落生長,肺、脾組織未見病...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗材料
    1.2 方法
        1.2.1 Ipr1/PPE68-rBCG的構(gòu)建
        1.2.2 動物免疫
        1.2.3 特異性脾淋巴細胞增殖實驗
        1.2.4 檢測血清中IgG2a的水平
        1.2.5 檢測血清中細胞因子IL-12、IFN-γ和IL-4的水平
        1.2.6 流式細胞儀檢測CD4+/CD8+T細胞的表達
        1.2.7 小鼠脾、肺荷菌量檢測
        1.2.8 脾、肺組織病理切片
        1.2.9 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果
    2.1 質(zhì)粒pBIPO酶切鑒定結(jié)果
    2.2 Ipr1/PPE68 rBCG菌落PCR鑒定結(jié)果
    2.3 小鼠血清中IgG2a的水平
    2.4 小鼠血清中IL-12、IFN-γ和IL-4的水平
    2.6 小鼠特異性脾淋巴增殖實驗的結(jié)果
    2.7 CD4+和CD8+T淋巴細胞表達情況
    2.8 脾、肺荷菌實驗的結(jié)果
    2.9 組織病理學表現(xiàn)
3 討論



本文編號：3801997