目的構(gòu)建Cre重組酶系統(tǒng)調(diào)控的Unc13基因胰島β細(xì)胞條件性敲除小鼠,為Unc13基因在胰島素分泌中扮演的角色和作用機(jī)制的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究提供更特異的動(dòng)物模型。方法運(yùn)用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Unc13^flox/flox轉(zhuǎn)基因小鼠,將其與胰島β細(xì)胞特異性表達(dá)Cre重組酶(Ins2-cre)工具鼠進(jìn)行雜交,采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)和測序等方法對(duì)其子代小鼠的基因型進(jìn)行鑒定,并對(duì)該基因敲除(knock out,KO)小鼠及其同窩野生(wild type,WT)小鼠的體質(zhì)量、糖耐量、胰島素分泌水平進(jìn)行測定。結(jié)果成功構(gòu)建胰島β細(xì)胞特異性Unc13基因條件性敲除小鼠(以下簡稱為Unc13 KO鼠)。進(jìn)一步研究顯示Unc13 KO鼠與WT鼠相比,體質(zhì)量無明顯變化,但糖耐量受損,胰島素第一時(shí)相分泌下降。結(jié)論成功構(gòu)建了Unc13基因胰島β細(xì)胞條件敲除小鼠動(dòng)物模型,為探討Unc13基因在糖尿病發(fā)生、發(fā)展中的作用提供研究平臺(tái)。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 采用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Flox小鼠
        1.2.1 構(gòu)建打靶載體
        1.2.2 顯微操作與F0代鑒定
        1.2.3 繁育純合突變小鼠
    1.3 Unc13基因胰島β細(xì)胞條件敲除小鼠構(gòu)建
    1.4 小鼠基因型的鑒定
        1.4.1 小鼠尾部基因組DNA提取
        1.4.2 小鼠基因組DNA的PCR擴(kuò)增反應(yīng)
        1.4.3 瓊脂糖凝膠電泳及結(jié)果分析
    1.5 小鼠腹腔葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(intra-peritoneal glu-cose tolerance test,IPGTT)及血清胰島素濃度測定
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 Flox小鼠構(gòu)建策略
    2.2 F1代雜合Flox小鼠構(gòu)建及基因型鑒定
    2.3 胰島β細(xì)胞條件性敲除鼠構(gòu)建及基因型鑒定
    2.4 Unc13 KO小鼠葡萄糖代謝能力下降
    2.5 Unc13 KO小鼠胰島素分泌功能受損
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