食源性致病菌大部分為革蘭氏陰性菌,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作為革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要毒力因子,其毒性作用主要表現(xiàn)在能夠使機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng),而炎癥反應(yīng)的發(fā)生能夠造成能量代謝的異常。三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)作為機(jī)體內(nèi)通用的“能量貨幣”,其胞內(nèi)濃度的變化能夠反映出能量代謝方式的改變。本文基于金納米十字(Au nanocrosses,AuNCs)-石墨烯量子點(diǎn)(graphene quantum dots,GQDs)納米組裝體(AuNCs-GQDs)探究大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)LPS對(duì)HeLa細(xì)胞胞內(nèi)ATP的影響,進(jìn)一步通過測定大腸桿菌LPS對(duì)HeLa細(xì)胞能量代謝相關(guān)生理指標(biāo)的影響,以及利用代謝組學(xué)研究大腸桿菌LPS對(duì)能量代謝相關(guān)代謝通路的影響,研究了大腸桿菌LPS對(duì)HeLa細(xì)胞能量代謝的影響機(jī)制。基于AuNCs-GQDs組裝體可視化研究大腸桿菌LPS對(duì)HeLa細(xì)胞胞內(nèi)ATP的影響。采用種子生長法合成AuNCs,并對(duì)其進(jìn)行表面修飾。將修飾有ATP適配體的GQDs與修飾有互補(bǔ)鏈DNA的...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞索引
第一章 緒論
    1.1 LPS簡介
        1.1.1 LPS的理化性質(zhì)
        1.1.2 LPS的毒性作用
    1.2 能量代謝
        1.2.1 能量代謝通路概述
        1.2.2 腫瘤細(xì)胞能量代謝方式
        1.2.3 腫瘤微環(huán)境對(duì)能量代謝的影響
    1.3 ATP生理作用及其檢測方法
        1.3.1 ATP的生理作用
        1.3.2 ATP的傳統(tǒng)檢測方法
        1.3.3 新型納米材料ATP熒光生物傳感器
    1.4 細(xì)胞代謝組學(xué)
        1.4.1 代謝組學(xué)簡介
        1.4.2 代謝組學(xué)手段研究腫瘤細(xì)胞能量代謝
    1.5 立題背景與意義
    1.6 主要研究內(nèi)容
第二章 構(gòu)建AuNCs-GQDs可視化探究大腸桿菌LPS對(duì)HeLa細(xì)胞ATP影響
    2.1 引言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 設(shè)備和儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 AuNCs-GQDs組裝體構(gòu)建
        2.3.2 ATP的定量檢測與特異性評(píng)價(jià)
        2.3.3 評(píng)價(jià)AuNCs-GQDs組裝體細(xì)胞毒性
        2.3.4 細(xì)胞成像
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 AuNCs-GQDs組裝體的傳感原理
        2.4.2 GQDs激發(fā)波長的選擇與組裝條件的優(yōu)化
        2.4.3 AuNCs-GQDs組裝體的表征
        2.4.4 AuNCs-GQDs組裝體對(duì)胞外ATP的檢測
        2.4.5 AuNCs-GQDs組裝體細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)
        2.4.6 AuNCs-GQDs組裝體對(duì)胞內(nèi)ATP的響應(yīng)
        2.4.7 大腸桿菌LPS對(duì)HeLa細(xì)胞胞內(nèi)ATP的影響
    2.5 本章小結(jié)
第三章 大腸桿菌LPS對(duì)HeLa細(xì)胞能量代謝相關(guān)生理指標(biāo)影響研究
    3.1 引言
    3.2 材料與儀器
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 設(shè)備和儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 炎癥因子的測定
        3.3.3 胞內(nèi)ATP含量的測定
        3.3.4 總NO含量與NO合酶活力測定
        3.3.5 線粒體活性氧與線粒體膜電位測定
        3.3.6 酶活性測定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 大腸桿菌LPS對(duì)HeLa細(xì)胞炎癥因子及ATP含量的影響
        3.4.2 大腸桿菌LPS對(duì)HeLa細(xì)胞NO含量的影響
        3.4.3 大腸桿菌LPS對(duì)線粒體功能的影響
        3.4.4 大腸桿菌LPS對(duì)能量代謝相關(guān)酶活性的影響
    3.5 本章小結(jié)
第四章 代謝組學(xué)探究大腸桿菌LPS對(duì)HeLa細(xì)胞能量代謝影響
    4.1 引言
    4.2 材料與儀器
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 設(shè)備和儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 實(shí)驗(yàn)分組
        4.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.3.3 細(xì)胞淬滅及胞內(nèi)物質(zhì)提取
        4.3.4 衍生化
        4.3.5 GC-MS檢測
        4.3.6 代謝數(shù)據(jù)預(yù)處理
        4.3.7 代謝數(shù)據(jù)處理與多元統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 能量代謝靶向代謝物的鑒定
        4.4.2 靶向代謝物的多元統(tǒng)計(jì)分析
        4.4.3 熱圖分析
        4.4.4 糖酵解、TCA循環(huán)、磷酸戊糖途徑及氨基酸相關(guān)代謝物分析
    4.5 本章小結(jié)
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄:作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3790539