目的:在大腸桿菌中重組表達(dá)貝類主要過敏原—原肌球蛋白(Pen a 1),并且評(píng)估其IgE結(jié)合活性。方法:首先基于Pen a 1的已知序列人工合成Pen a 1基因,其次將其與質(zhì)粒p ET-28a連接以構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)-Pen a 1,經(jīng)測(cè)序、酶切鑒定后導(dǎo)入表達(dá)宿主E. coli BL21(DE3)細(xì)胞中。通過IPTG誘導(dǎo),重組表達(dá)Pen a 1蛋白,鎳柱純化表達(dá)產(chǎn)物,并采用SDS-PAGE電泳及質(zhì)譜技術(shù)鑒定所得重組蛋白。最后應(yīng)用貝類過敏患者采用LICA技術(shù)檢測(cè)該重組蛋白的IgE結(jié)合活性。結(jié)果:PCR結(jié)果表明,目的基因全長(zhǎng)為930 bp,與理論預(yù)測(cè)值一致。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,目的蛋白在宿主菌內(nèi)以可溶性蛋白的形式高效表達(dá),分子量約為36 k D,大小與理論值相符。質(zhì)譜鑒定結(jié)果進(jìn)一步說明所得的重組蛋白為原肌球蛋白Pen a 1。免疫分析結(jié)果表明該蛋白具有較高的IgE結(jié)合能力。結(jié)論:成功表達(dá)、純化出有良好免疫學(xué)活性的重組原肌球蛋白Pen a 1,為進(jìn)一步研究Pen a 1在貝類動(dòng)物如蝦類過敏的診斷和治療中作用奠定基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 血清樣本
    1.3 Pen a 1基因的合成
    1.4 重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)-Pen a
    1.5 重組過敏原蛋白Pen a 1的表達(dá)、純化
    1.6 重組過敏原蛋白Pen a
2 結(jié)果
    2.1 Pen a 1基因的PCR擴(kuò)增鑒定
    2.2 重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a(+)-Pen a
    2.3 目的蛋白的表達(dá)、純化及及鑒定用1 mmol/L
    2.4 血清IgE抗體與原核表達(dá)產(chǎn)物Pen a 1的結(jié)合能力
3 討論



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