目的:為了追蹤瘧原蟲發(fā)育及侵染的情況,構(gòu)建及篩選胞漿穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)的伯氏瘧原蟲。方法:構(gòu)建含有伯氏瘧原蟲230p基因和GFP基因的重組質(zhì)粒pL0035-GFP,質(zhì)粒線性化后通過電轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)入野生型伯氏瘧原蟲;基于雙交換同源重組原理,利用乙胺嘧啶篩選獲得在230p基因處插入GFP的重組瘧原蟲;有限稀釋法篩選表達(dá)GFP的單克隆重組伯氏瘧原蟲;PCR鑒定重組瘧原蟲基因型,熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)檢測GFP表達(dá)情況。結(jié)果:PCR及DNA測序結(jié)果表明GFP基因成功整合到伯氏瘧原蟲基因230p;熒光顯微鏡可觀察到重組瘧原蟲胞漿呈綠色熒光,流式細(xì)胞術(shù)檢測到綠色熒光信號(hào)。結(jié)論:成功構(gòu)建胞漿表達(dá)綠色熒光蛋白的伯氏瘧原蟲。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株、質(zhì)粒和瘧原蟲株
    1.2 主要材料和試劑
    1.3 質(zhì)粒pL0035-GFP的構(gòu)建
        1.3.1 獲取目的片段
        1.3.2 載體和目的片段連接
    1.4 瘧原蟲轉(zhuǎn)染
    1.5 重組瘧原蟲篩選與單克隆篩選
    1.6 表達(dá)GFP的重組瘧原蟲的紅內(nèi)期成像與流式檢測
2 結(jié)果
    2.1 構(gòu)建胞漿表達(dá)GFP伯氏瘧原蟲的策略
    2.2 重組質(zhì)粒pL0035-GFP的構(gòu)建
    2.3 伯氏瘧原蟲轉(zhuǎn)染后重組子的鑒定
    2.4 轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pL0035-GFP的瘧原蟲在紅內(nèi)期表達(dá)GFP
3 討論



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