目的:檢測小鼠1-細(xì)胞期受精卵各細(xì)胞周期中細(xì)胞分裂周期蛋白14B (CDC14B)的表達(dá)水平及其定位,初步闡明CDC14B對哺乳動物受精卵早期發(fā)育調(diào)控的機(jī)制。方法:通過超排卵技術(shù)分別收集小鼠1-細(xì)胞期受精卵,采用RT-PCR和Western blotting法檢測小鼠不同細(xì)胞周期1-細(xì)胞期受精卵中CDC14BmRNA和蛋白表達(dá)水平;采用細(xì)胞免疫熒光法觀察小鼠不同細(xì)胞周期1-細(xì)胞期受精卵中CDC14B和β微管蛋白(β-tubulin)的共定位情況。結(jié)果:與G1期比較,小鼠S、G2和M期1-細(xì)胞期受精卵中CDC14BmRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.05或P<0.01)。間接免疫熒光實驗,CDC14B (紅色熒光)和β-tubulin(綠色熒光)在G1期和S期共定位于小鼠受精卵皮質(zhì);在G2早期,CDC14B和β-tubulin共定位于皮質(zhì)和細(xì)胞質(zhì);在G2晚期,部分CDC14B入核;在M期,CDC14B和β-tubulin共定位于紡錘體。結(jié)論:CDC14B在小鼠不同細(xì)胞周期1-細(xì)胞期受精卵中動態(tài)表達(dá),CDC14B存在核漿紡錘體轉(zhuǎn)位,CDC14B的定位變化可能調(diào)控紡錘體的功能...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 動物、主要試劑和儀器
    1.2 小鼠受精卵的采集和培養(yǎng)
    1.3 RT-PCR法檢測1-細(xì)胞期受精卵中CDC14B mRNA表達(dá)水平
    1.4 Western blotting法檢測1-細(xì)胞期受精卵中CDC14B蛋白表達(dá)水平
    1.5 細(xì)胞免疫熒光法檢測CDC14B和β-tubulin在小鼠1-細(xì)胞期受精卵中各期的亞細(xì)胞共定位
    1.6 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 小鼠不同細(xì)胞周期1-細(xì)胞期受精卵中CDC14BmRNA表達(dá)水平
    2.2 小鼠不同細(xì)胞周期1-細(xì)胞期受精卵中CDC14B蛋白表達(dá)水平
    2.3 CDC14B和β-tubulin在小鼠不同細(xì)胞周期1-細(xì)胞期受精卵中的共定位
3 討論



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