目的制備抗UspA1蛋白單克隆抗體,研制能快速、靈敏、準確檢測卡他莫拉菌的膠體金免疫層析試紙,以期用于人卡他莫拉菌的臨床檢測。方法將重組UspA1-His蛋白作為抗原,免疫小鼠,并制備單克隆抗體;通過Western blot技術以及免疫熒光技術鑒定抗體的特異性;以雙抗體夾心的原理研制膠體金免疫層析檢測試紙條,并對其特異性、敏感性及穩(wěn)定性進行評價分析。結(jié)果篩選出兩株分泌特異性抗體的雜交瘤細胞株,經(jīng)腹水制備純化得到單克隆抗體,并驗證了兩種抗體均能特異性識別天然UspA1蛋白;利用雙抗夾心原理制備的膠體金試紙能在10 min內(nèi)快速檢測卡他莫拉菌,檢測靈敏度高(1×10⁵ CFU/ml)、特異性強,與其他常見9種的呼吸道病原菌諸如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎支原體、嗜肺軍團菌等無交叉反應;試紙條在37℃保存有良好的重復性和穩(wěn)定性;200份臨床樣品檢測結(jié)果與平板培養(yǎng)法的陽性符合率為93.3%。結(jié)論本研究制備了特異性強的抗UspA1蛋白單克隆抗體;以此研制的膠體金免疫層析試紙可快速、簡便、靈敏的檢測卡他莫拉菌,適用于呼吸道感染的臨床快速檢測。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 主要設備、試劑
        1.3 實驗動物
    2 方法
        2.1 抗UspA1蛋白單克隆抗體的制備
            2.1.1 動物免疫
            2.1.2 雜交瘤細胞株的制備
            2.1.3 腹水制備
        2.2 單克隆抗體特異性分析
            2.2.1 抗體亞型鑒定
            2.2.2 間接ELISA鑒定
            2.2.3 Western blot特異性鑒定
            2.2.4 單克隆抗體的特異性鑒定
        2.3 膠體金免疫層析試紙條的制備
            2.3.1 膠體金結(jié)合墊的制備
            2.3.2 檢測線和質(zhì)控線的包被
            2.3.3 免疫層析試紙條的組裝
        2.4 測試方法與判定標準
        2.5 試紙條的質(zhì)量測試
            2.5.1 特異性測試
            2.5.2 靈敏性測試
            2.5.3 穩(wěn)定性和重復性測試
        2.6 試紙條的初步臨床應用
結(jié) 果
    1 單克隆抗體的制備
    2 單克隆抗體特性鑒定
        2.1 亞型鑒定
        2.2 Western blot鑒定
        2.3 單克隆抗體特異性
    3 膠體金試紙的制備
        3.1 膠體金試紙的配對
        3.2 試紙條特異性測試
        3.3 靈敏性測試
        3.4 穩(wěn)定性和重復性測試
        3.5 初步臨床應用檢測結(jié)果
討 論



本文編號：3739531