生物材料疫苗遞送系統(tǒng)的免疫佐劑效應(yīng)在增強抗原或免疫增強劑的免疫應(yīng)答方面具有重要作用。較常規(guī)載體,納米／微米球形顆粒疫苗遞送系統(tǒng)可高效包載抗原及免疫增強劑,增強抗原穩(wěn)定性,促進抗原遞呈細胞（antigen presenting cell, APC）對抗原的胞吞,加工,促進抗原的交叉呈遞,引起更強的體液免疫和細胞免疫反應(yīng)。本課題以高分子生物材料為載體,負載抗原后構(gòu)建抗原遞送系統(tǒng),研究其體內(nèi)外的免疫反應(yīng)與佐劑機制。研究內(nèi)容包括以下三個方面：1)負載百日咳毒素（PTd）的PLGA納米／微米球疫苗的制備及其免疫學(xué)機制研究。近年來,美國、澳大利亞、英國等國家,具高致病率、致死率的百日咳大量復(fù)發(fā),研發(fā)有效預(yù)防百日咳新型疫苗具有重大意義。以FDA認證,具有良好生物相容性的聚乳酸-聚羥基乙酸（poly（lactic-co-glycolic acid）, PLGA）為載體,以脫毒百日咳毒素（Pertussis Toxin, PTd）為抗原,經(jīng)雙乳化法制備PTd PLGA納米／微米球混合制劑（PTd PL ANP./MP.）。較裸抗原,PTd PLGA NP./MP疫苗制劑有效地促進了抗原被巨噬細胞的吞噬。... 

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1. 疫苗的發(fā)展
        1.1 疫苗的種類
            1.1.1 預(yù)防性疫苗
            1.1.2 治療性疫苗
        1.2 疫苗的免疫應(yīng)答
        1.3 疫苗免疫佐劑
    2. 納米球作為疫苗載體的研究
        2.1 脂質(zhì)體
        2.2 殼聚糖
        2.3 生物可降解性聚合物
            2.3.1 聚乳酸-羥基乙酸(poly(L-lactide-co-gly-colide),PLGA)
            2.3.2 聚乙烯亞胺(Polyethyleneimine,PEI)
            2.3.3 丙烯酸聚合物
    3. 疫苗遞送系統(tǒng)的性質(zhì)對免疫應(yīng)答的影響
        3.1 球形顆粒粒徑
        3.2 球形顆粒表面電荷
        3.3 納米/微米球顆粒疏水性
        3.4 抗原與納米/微米球疫苗遞送載體的加載方式
    4. 納米/微米球形疫苗載體佐劑效應(yīng)的免疫學(xué)機制
        4.1 抗原儲存
        4.2 APCs的攝取和活化
        4.3 溶酶體逃逸
        4.4 補體激活
    5. 課題的提出
第二章 負載百日咳毒素(PTd)的PLGA納米/微米球(NP./MP.)作為疫苗的可行性及其免疫學(xué)機制研究
    1. 材料、儀器及動物
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 動物
    2. 實驗方法
        2.1 PLGA納米/微米球的制備及表征
            2.1.1 PLGA納米/微米球的制備及表征
            2.1.2 PTd PLGA納米/微米球內(nèi)包封抗原濃度測定
        2.2 MTT法檢測PTd NP./MP.的細胞毒性
        2.3 巨噬細胞J774.2對PLGA NP./MP.的內(nèi)吞
            2.3.1 流式細胞術(shù)檢測BSA(F1TC)NP./MP.的內(nèi)吞
            2.3.2 激光共聚焦顯微鏡檢測BSA(FITC)NP./MP.的內(nèi)吞
            2.3.3 激光共聚焦顯微鏡檢測PTd.NP./MP.的內(nèi)吞
        2.4 PTd NP./MP.的免疫反應(yīng)評價
            2.4.1 小鼠血清制備及特異性抗PT抗體IgG滴度檢測
            2.4.2 特異性抗PT抗體IgG亞型檢測
            2.4.3 小鼠脾臟淋巴細胞的分離及細胞因子檢測
            2.4.4 巨噬細胞分離及NO分泌的檢測
        2.5 統(tǒng)計分析
    3. 結(jié)果
        3.1 PLGA納米/微米球的粒徑,電位,表面形貌及包封抗原濃度
        3.2 PTd NP./MP.的體外細胞毒性
        3.3 J774.2細胞對PLGA NP./MP.的內(nèi)吞
            3.3.1 J774.2細胞對BSA(FITC)NP./MP.的內(nèi)吞
            3.3.2 J774.2細胞對PTd(FITC)NP./MP.的內(nèi)吞
        3.4 PTd NP./MP.的免疫應(yīng)答
            3.4.1 皮下免疫
            3.4.2 皮內(nèi)免疫接種PTd NP./MP
                3.4.2.1 特異性抗百日咳毒素抗體IgG
                3.4.2.2 特異性IgG亞型檢測
                3.4.2.3 細胞因子的釋放
                3.4.2.4 巨噬細胞分泌的NO
        3.5 PTd NP./MP.皮下與皮內(nèi)免疫應(yīng)答的比較
    4. 本章小結(jié)
第三章 新型酸敏感型陽離子納米球PEDG作為疫苗遞送載體的可行性及免疫機制研究
    1. 材料,儀器及動物
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 動物
    2. 實驗方法
        2.1 mPEG-b-PDPA-b-PGEM的合成
            2.1.1 mPEG-b-PDPA-b-PtBAM的合成
            2.1.2 mPEG-b-PDPA-b-PGEM的合成
        2.2 PEDG聚合物的表征,空白納米粒及Nano.-OVA的制備
        2.3 PEDG酸性敏感性測定及Nanno.-OVA的抗原釋放
        2.4 骨髓粒細胞的提取及BMDCs的誘導(dǎo),分離及鑒定
        2.5 PEDG NPs對BMDCs的促成熟作用
        2.6 BMDCs對Nanno.OVA的捕獲
        2.7 Nanno.OVA體外對BMDCs及巨噬細胞Raw 264.7的活化作用
        2.8 BMDCs對Nanno.OVA的體外交叉提呈
        2.9 體內(nèi)追蹤羅丹明標記的抗原
        2.10 動物免疫及不同OVA劑型的體內(nèi)免疫應(yīng)答
            2.10.1 特異性抗體應(yīng)答檢測
            2.10.2 特異性抗OVA抗體IgG亞型檢測
            2.10.3 小鼠脾臟淋巴細胞的分離及細胞因子檢測
        2.11 抗原的體內(nèi)提呈
        2.12 統(tǒng)計分析
    3. 結(jié)果
        3.1 PEDG聚合物的合成和物理特性
        3.2 PEDG對抗原OVA的包封及其酸敏感性
        3.3 抗原被BMDCs的捕獲及其胞內(nèi)定位
        3.4 PEDG納米球促BMDCs及巨噬細胞Raw 264.7的成熟與活化
        3.5 PEDG納米球促進抗原的體外交叉提呈
        3.6 抗原的體內(nèi)遷移
        3.7 Nano.-OVA的體內(nèi)獲得性免疫應(yīng)答
        3.8 抗原的體內(nèi)交叉提呈
    4. 本章小結(jié)
第四章 陽離子納米載體佐劑作用的機制研究
    1. 材料、儀器及動物
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 動物
    2. 實驗方法
        2.1 PEC、PECG-1、PECG-2共聚物的合成,表征及納米球的制備
        2.2 BMDCs的提取及體外誘導(dǎo)
        2.3 BMDCs對PEC、PECG-1、PECG2 NPs的吞噬
        2.4 PEC、PECG-1、PECG-2 NPs對BMDCs的促成熟作用
        2.5 PEC、PECG-1、PECG-2 NPs對抗原體外交叉提呈的影響
        2.6 PEC、PECG-1、PECG-2 NPs在體內(nèi)對外源抗原的滯留及回流淋巴結(jié)的遷移
        2.7 PEC、PECG-1、PECG-2 NPs的體內(nèi)免疫應(yīng)答
    3. 結(jié)果與討論
        3.1 不同表面電荷納米球的合成及物理特性
        3.2 納米球表面電荷對BMDCs捕獲的作用
        3.3 PEC、PECG-1、PECG-2 NPs促BMDCs成熟
        3.4 納米球表面電荷越多更能刺激抗原的體外交叉提呈
        3.5 表面電荷對納米球體內(nèi)遷移的作用
        3.6 納米球表面電荷對其體內(nèi)應(yīng)答的作用
    4. 本章小結(jié)
參考文獻
全文總結(jié)
作者簡歷
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Dendritic cell-based vaccine for pancreatic cancer in Japan[J]. Masato Okamoto,Masanori Kobayashi,Yoshikazu Yonemitsu,Shigeo Koido,Sadamu Homma.  World Journal of Gastrointestinal Pharmacology and Therapeutics. 2016(01)
[2]Innate immunity and hepatocarcinoma: Can toll-like receptors open the door to oncogenesis?[J]. Jorge André Gomes Lopes,Marta Borges-Canha,Pedro Pimentel-Nunes.  World Journal of Hepatology. 2016(03)



本文編號：3706785