Ⅰ型單純皰疹病毒（HSV-1）是危害人類健康的常見病原體之一,能夠通過受損皮膚或黏膜感染宿主細胞并引起多種疾病。HSV-1的侵入激活先天免疫模式識別受體,誘導干擾素β（IFN-β）的產(chǎn)生,通過表達干擾素刺激基因（ISG）發(fā)揮抗病毒功能。近年來,干擾素誘導的四肽重復蛋白1（IFIT1）在病毒感染過程中的作用引起了廣大研究者的關(guān)注。然而,其具體機制尚未完全清楚。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建了小鼠成纖維細胞（L929） IFIT1敲除細胞株,免疫印跡方法檢測敲除細胞株IFIT1在蛋白質(zhì)水平的表達。轉(zhuǎn)染HT-DNA和Poly[I:C]刺激L929 WT和IFIT1敲除細胞株,實時定量PCR技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),HT-DNA刺激敲除細胞時,IFN-β及下游ISGs的表達量顯著升高。IFN-β的表達量比L929-WT組平均高出13. 4倍,IFIT1和趨化因子10 （CXC chemokine ligand-10,CXCL10）的表達量比L929 WT組分別平均高出6. 7倍和21倍（P＜0. 001）,而Poly[I:C]刺激無明顯變化（P＞0. 05）,表明IFIT1是通過DNA信號通路來... 

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 試劑及儀器
    1.3 sgRNA的設(shè)計與合成
    1.4 IFIT1敲除質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 敲除質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染及敲除細胞株的篩選
    1.6 免疫印跡驗證敲除細胞株在蛋白質(zhì)水平的表達
    1.7 實時定量PCR檢測IFN-β及ISG的表達量
    1.8 實時定量PCR測定HSV-1-VP26-mCherry病毒的拷貝數(shù)
    1.9 感染IFIT1敲除細胞株檢測病毒的復制及增殖能力
    1.1 0 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 CRISPR/Cas9-IFIT1基因敲除質(zhì)粒及敲除細胞株的鑒定
    2.2 實時定量PCR檢測IFIT1基因的缺失上調(diào)IFN-β及ISG的表達量
    2.3 HSV-1-VP26-mCherry病毒濃度測定
    2.4 IFIT1基因缺失抑制HSV-1病毒的增殖
    2.5 IFIT1基因缺失抑制HSV-1病毒的拷貝數(shù)
3 討論



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