�、裥蛦渭儼捳畈《荆℉SV-1）是危害人類健康的常見(jiàn)病原體之一,能夠通過(guò)受損皮膚或黏膜感染宿主細(xì)胞并引起多種疾病。HSV-1的侵入激活先天免疫模式識(shí)別受體,誘導(dǎo)干擾素β（IFN-β）的產(chǎn)生,通過(guò)表達(dá)干擾素刺激基因（ISG）發(fā)揮抗病毒功能。近年來(lái),干擾素誘導(dǎo)的四肽重復(fù)蛋白1（IFIT1）在病毒感染過(guò)程中的作用引起了廣大研究者的關(guān)注。然而,其具體機(jī)制尚未完全清楚。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建了小鼠成纖維細(xì)胞（L929） IFIT1敲除細(xì)胞株,免疫印跡方法檢測(cè)敲除細(xì)胞株IFIT1在蛋白質(zhì)水平的表達(dá)。轉(zhuǎn)染HT-DNA和Poly[I:C]刺激L929 WT和IFIT1敲除細(xì)胞株,實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),HT-DNA刺激敲除細(xì)胞時(shí),IFN-β及下游ISGs的表達(dá)量顯著升高。IFN-β的表達(dá)量比L929-WT組平均高出13. 4倍,IFIT1和趨化因子10 （CXC chemokine ligand-10,CXCL10）的表達(dá)量比L929 WT組分別平均高出6. 7倍和21倍（P＜0. 001）,而Poly[I:C]刺激無(wú)明顯變化（P＞0. 05）,表明IFIT1是通過(guò)DNA信號(hào)通路來(lái)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 試劑及儀器
    1.3 sgRNA的設(shè)計(jì)與合成
    1.4 IFIT1敲除質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 敲除質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染及敲除細(xì)胞株的篩選
    1.6 免疫印跡驗(yàn)證敲除細(xì)胞株在蛋白質(zhì)水平的表達(dá)
    1.7 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)IFN-β及ISG的表達(dá)量
    1.8 實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定HSV-1-VP26-mCherry病毒的拷貝數(shù)
    1.9 感染IFIT1敲除細(xì)胞株檢測(cè)病毒的復(fù)制及增殖能力
    1.1 0 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 CRISPR/Cas9-IFIT1基因敲除質(zhì)粒及敲除細(xì)胞株的鑒定
    2.2 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)IFIT1基因的缺失上調(diào)IFN-β及ISG的表達(dá)量
    2.3 HSV-1-VP26-mCherry病毒濃度測(cè)定
    2.4 IFIT1基因缺失抑制HSV-1病毒的增殖
    2.5 IFIT1基因缺失抑制HSV-1病毒的拷貝數(shù)
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