本文關(guān)鍵詞：炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌小鼠模型的建立及紅木生育三烯酚對(duì)其外周血T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本研究通過(guò)化學(xué)誘導(dǎo)劑氧化偶氮甲烷(AOM)聯(lián)合葡聚糖硫酸鈉鹽(DSS)建立炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌小鼠模型,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究奠定動(dòng)物模型基礎(chǔ),同時(shí)初步探究紅木生育三烯酚對(duì)結(jié)腸癌小鼠外周血T淋巴細(xì)胞、IL-6、IFN-γ的影響。方法1.AOM-DSS誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌小鼠模型的建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按體重隨機(jī)均分為4組,每組15只,溶劑對(duì)照組、DSS低分子量組、DSS高分子量組和DSS低分子量+DSS高分子量組。結(jié)腸癌造模動(dòng)物腹腔注射氧化偶氮甲烷AOM(10mg/kg.BW)一次,一周后給予含3%致炎劑葡聚糖硫酸鈉(DSS)蒸餾水連續(xù)飲用7天,換蒸餾水連續(xù)飲用14天,含2%DSS蒸餾水連續(xù)飲用5天,蒸餾水連續(xù)飲用16天,含2%DSS蒸餾水連續(xù)飲用5天,蒸餾水連續(xù)飲用。溶劑對(duì)照組腹腔注射與AOM同體積生理鹽水,連續(xù)飲用蒸餾水直至造模第20周結(jié)束。每天觀(guān)察并記錄動(dòng)物毛發(fā)、糞便性狀及是否出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)血便,每周記錄動(dòng)物體重1次。造模第20周結(jié)束時(shí)摘眼球取血,頸椎脫臼處死小鼠,取動(dòng)物脾臟稱(chēng)量并記錄臟器系數(shù)。取由肛門(mén)至盲腸末端的全部結(jié)直腸,沿結(jié)腸帶垂直剖開(kāi)直結(jié)腸,用生理鹽水沖洗后觀(guān)察腸道內(nèi)病變情況,計(jì)數(shù)腫瘤形成個(gè)數(shù),HE染色觀(guān)察動(dòng)物結(jié)腸組織和脾組織的病理學(xué)改變。2.紅木生育三烯酚對(duì)AOM-DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸癌小鼠外周血T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按體重隨機(jī)均分為5組,每組15只,包括1個(gè)溶劑對(duì)照組和4個(gè)結(jié)腸癌造模組,結(jié)腸癌造模組又分別包括腫瘤模型對(duì)照組、低劑量紅木生育三烯酚組、中劑量紅木生育三烯酚組和高劑量紅木生育三烯酚組。溶劑對(duì)照組和腫瘤模型組每天經(jīng)口給予大豆油灌胃0.1mg/kg.BW,低、中、高生育三烯酚實(shí)驗(yàn)組分別經(jīng)口灌胃給予δ-生育三烯酚當(dāng)量為5mg/kg.BW、10mg/kg.BW、20mg/kg.BW的紅木生育三烯酚。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃1周后,結(jié)腸癌造模組動(dòng)物腹腔注射氧化偶氮甲烷(AOM)10mg/kg.BW一次,一周后給予3%致炎劑葡聚糖硫酸鈉(DSS分子量為36000-50000MW)連續(xù)飲用7天,換蒸餾水連續(xù)飲用14天,2%DSS連續(xù)飲用5天,蒸餾水連續(xù)飲用16天,2%DSS連續(xù)飲用5天,蒸餾水連續(xù)飲用。溶劑對(duì)照組腹腔注射AOM同體積生理鹽水,連續(xù)飲用蒸餾水直至造模第20周結(jié)束。每天觀(guān)察動(dòng)物毛發(fā)、糞便性狀及是否出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)血便并記錄,每周記錄動(dòng)物體重1次。造模第20周結(jié)束時(shí)摘眼球取血,頸椎脫臼處死小鼠,取動(dòng)物組織(胸腺、肝臟、雙腎、脾臟)稱(chēng)量并記錄臟器系數(shù)。取由肛門(mén)至盲腸末端的全部結(jié)直腸,沿結(jié)腸帶垂直剖開(kāi)直結(jié)腸,用生理鹽水沖洗后觀(guān)察腸道內(nèi)病變情況,計(jì)數(shù)腫瘤形成個(gè)數(shù),HE染色觀(guān)察動(dòng)物結(jié)腸組織和脾組織的病理學(xué)改變。全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定全血血液學(xué)指標(biāo);流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及CD4+T與CD8+T比率;ELISA方法檢測(cè)外周血細(xì)胞因子IL-6、IFN-γ的含量。結(jié)果AOM-DSS誘導(dǎo)炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌小鼠模型的建立:1.小劑量、單次腹腔注射AOM(10mg/kg.BW)聯(lián)合2-3%DSS(分子量為36000-50000MW)飲水,3個(gè)循環(huán),20周后,可以誘導(dǎo)CD-1(ICR)小鼠腸粘膜增厚、皺襞紊亂,結(jié)腸遠(yuǎn)端腫瘤生長(zhǎng),并且腫瘤形成率為100%。2.AOM/DSS模型誘導(dǎo)小鼠腸粘膜出現(xiàn)不同程度的增厚,皺襞紊亂,可觀(guān)察到個(gè)數(shù)不等大小不一的結(jié)直腸腫瘤生長(zhǎng)。肉眼可見(jiàn)生成的腫瘤向腸腔內(nèi)突出,部分小腫瘤相互融合成大腫瘤,形成腫瘤數(shù)量多時(shí)腫瘤相互連接,形成片狀。HE染色,鏡下病理觀(guān)察結(jié)果顯示,黏膜層及黏膜下層出現(xiàn)廣泛的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);層內(nèi)可觀(guān)察到腺管樣結(jié)構(gòu),具有組織異型性;腺體組織結(jié)構(gòu)紊亂、被破壞。形成的腫瘤包括從低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變到高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變的病理改變,且腫瘤的發(fā)展全部在原位癌階段,未見(jiàn)浸潤(rùn)性癌的形成。3.AOM/DSS模型小鼠脾腫大,脾臟系數(shù)增大。HE染色可見(jiàn)多核巨細(xì)胞增多,紅髓消失,髓外造血。紅木生育三烯酚對(duì)AOM-DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸癌小鼠外周血T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響:1.腫瘤模型對(duì)照組小鼠平均體重低于溶劑對(duì)照組,且在給予DSS飲水后平均體重較前一周有降低趨勢(shì)。5mg/kg.BW、10mg/kg.BW、20mg/kg.BW紅木生育三烯酚組小鼠平均體重高于腫瘤模型對(duì)照組,低于溶劑對(duì)照組。2.腫瘤模型對(duì)照組白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞比積、血小板、嗜酸性粒細(xì)胞與溶劑對(duì)照組相比下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5mg/kg.BW生育三烯酚組白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞與溶劑對(duì)照組相比下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。10mg/kg.BW、20mg/kg.BW紅木生育三烯酚組白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、與溶劑對(duì)照組相比下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.10mg/kg.BW、20mg/kg.BW紅木生育三烯酚組能顯著提高結(jié)腸癌小鼠外周血CD4+/CD8+比率;20mg/kg.BW紅木生育三烯酚組能顯著提高結(jié)腸癌小鼠外周血IFN-γ表達(dá)量;10mg/kg.BW、20mg/kg.BW紅木生育三烯酚組能顯著降低結(jié)腸癌小鼠外周血IL-6表達(dá)量,與腫瘤模型對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.小劑量(10mg/kg.BW)、單次腹腔注射AOM聯(lián)合2-3%DSS(分子量36000-50000MW)飲水3個(gè)循環(huán),20周后,可以成功誘導(dǎo)CD-1(ICR)小鼠發(fā)生結(jié)腸腫瘤,并且腫瘤形成率為100%。2.紅木生育三烯酚能調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子的表達(dá),改善AOM/DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸癌小鼠異常的免疫狀態(tài),調(diào)節(jié)免疫失衡。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌小鼠 氧化偶氮甲烷 葡聚糖硫酸鈉鹽 紅木生育三烯酚 T淋巴細(xì)胞 白介素-6 干擾素-γ
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.35;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-14
• 縮略語(yǔ)14-15
• 前言15-19
• 研究現(xiàn)狀、成果15-18
• 研究目的、方法18-19
• 一 AOM-DSS誘導(dǎo)炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌小鼠模型的建立19-35
• 1.1 材料與方法19-22
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物19
• 1.1.2 主要試劑19
• 1.1.3 主要儀器19-20
• 1.1.4 炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌小鼠模型的建立20-21
• 1.1.5 觀(guān)察指標(biāo)及檢測(cè)方法21-22
• 1.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22
• 1.2 結(jié)果22-31
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況觀(guān)察22-24
• 1.2.2 小鼠體重及脾體比情況24-25
• 1.2.3 結(jié)腸組織標(biāo)本大體情況觀(guān)察25-27
• 1.2.4 小鼠結(jié)腸形態(tài)及結(jié)腸腫瘤組織形態(tài)學(xué)改變27-29
• 1.2.5 小鼠脾臟組織形態(tài)學(xué)改變29-31
• 1.3 討論31-34
• 1.4 小結(jié)34-35
• 二 紅木生育三烯酚對(duì)AOM-DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸癌小鼠外周血T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響35-60
• 1. 材料與方法35-40
• 1.1 材料35-36
• 1.1.1 紅木生育三烯酚35
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物35
• 1.1.3 主要試劑35-36
• 1.1.4 主要儀器36
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法36-40
• 1.2.1 動(dòng)物分組36-37
• 1.2.2 造模劑量及方法37
• 1.2.3 紅木生育三烯酚對(duì)結(jié)腸癌小鼠一般情況的影響37
• 1.2.4 紅木生育三烯酚對(duì)結(jié)腸癌小鼠體重、臟器系數(shù)及腫瘤形成的影響37-38
• 1.2.5 動(dòng)物組織病理學(xué)檢查38
• 1.2.6 五分類(lèi)血球儀測(cè)定結(jié)腸癌小鼠血液學(xué)指標(biāo)38
• 1.2.7 流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)腸癌小鼠外周血CD~(4+)、CD~(8+)T淋巴細(xì)胞38-39
• 1.2.8 ELISA法測(cè)定結(jié)腸癌小鼠外周血細(xì)胞因子IL-6、IFN-γ 含量39-40
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理40
• 2.結(jié)果40-54
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況觀(guān)察40-43
• 2.1.1 紅木生育三烯酚對(duì)結(jié)腸癌造模小鼠便血及脫肛情況的影響40-41
• 2.1.2 紅木生育三烯酚對(duì)結(jié)腸癌小鼠生存時(shí)間的影響41-43
• 2.2 紅木生育三烯酚對(duì)結(jié)腸癌小鼠體重的影響43-45
• 2.3 紅木生育三烯酚對(duì)結(jié)腸癌小鼠臟器系數(shù)的影響45-46
• 2.4 紅木生育三烯酚對(duì)小鼠結(jié)腸腫瘤形成的影響46-47
• 2.5 紅木生育三烯酚對(duì)結(jié)腸癌小鼠結(jié)腸組織、脾臟組織病理學(xué)改變47-51
• 2.5.1 小鼠結(jié)腸形態(tài)及結(jié)腸腫瘤組織形態(tài)學(xué)改變47-49
• 2.5.2 小鼠脾臟的組織形態(tài)學(xué)改變49-51
• 2.6 紅木生育三烯酚對(duì)結(jié)腸癌小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響51-52
• 2.7 紅木生育三烯酚對(duì)小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞型的影響52-53
• 2.8 紅木生育三烯酚對(duì)小鼠外周血細(xì)胞因子IFNγ、IL-6 含量的影響53-54
• 3 討論54-59
• 4 小結(jié)59-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-68
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明68-69
• 綜述 生育三烯酚抗炎抗腫瘤相關(guān)信號(hào)通路研究進(jìn)展69-80
• 綜述參考文獻(xiàn)75-80
• 致謝80-81

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 萬(wàn)德森;;結(jié)直腸癌流行病學(xué)與預(yù)防[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2011年01期

  本文關(guān)鍵詞：炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌小鼠模型的建立及紅木生育三烯酚對(duì)其外周血T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：368009