目的外界環(huán)境因素會對霍亂弧菌的毒力表達產(chǎn)生影響,AphB作為霍亂弧菌毒力調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵因子,受氧壓抑制作用明顯。本實驗旨在研究氧壓抑制AphB活性的關(guān)鍵位點及機制。方法利用誘變菌株XL1Red對aphB基因進行隨機突變,獲得突變子文庫;將受到AphB調(diào)控的tcpP基因的啟動子區(qū)域與lux報告基因相融合,獲得檢測用報告質(zhì)粒;取含有aphB突變基因及報告質(zhì)粒的菌株在有氧條件下進行培養(yǎng),通過檢測Lux值篩選目標突變株;利用細菌雙雜交系統(tǒng),進一步研究篩選到的突變位點感受氧壓的機制。結(jié)果篩選到的突變株S267L、M113I和M244I在有氧條件下均表現(xiàn)出高轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性,分別是WT（野生型）的22.8、173.3、30.2倍（P<0.001）�；魜y弧菌驗證S267L、M113I是WT的8.2、13.3倍,M244I是WT的14.8倍（P<0.01）。細菌雙雜交實驗結(jié)果表明M113I通過改變蛋白聚合能力從而抵抗氧壓的抑制作用。結(jié)論 S267、M113和M244為氧壓抑制AphB活性的關(guān)鍵位點。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 氧壓抑制AphB活性的關(guān)鍵位點篩選
            2.1.1 aphB基因突變子文庫的建立
            2.1.2 篩選氧壓抑制AphB活性的位點
        2.2 篩選所得突變子在霍亂弧菌中的驗證
            2.2.1 構(gòu)建重組質(zhì)粒pBAD-aphB點突變
            2.2.2 篩選的突變子在霍亂弧菌中的驗證
        2.3 細菌雙雜交法檢測分析氧壓抑制AphB活性的機制
            2.3.1 T25和T18融合aphB突變基因的重組質(zhì)粒構(gòu)建
            2.3.2 細菌雙雜交
結(jié)果
    1氧壓抑制AphB活性的關(guān)鍵位點篩選
    2篩選所得突變子在霍亂弧菌中的驗證
    3 細菌雙雜交法研究氧壓抑制AphB活性機制
討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]甘磷酸膽堿對霍亂弧菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子AphB活性的影響[J]. 蘇萌,杜孌英,王卉,鐘增濤,高妍夏.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2016 (02)



本文編號：3678900