目的測定輪狀病毒2種宿主細(xì)胞內(nèi)CD63的高低表達(dá)對病毒體外復(fù)制的影響,為探究輪狀病毒與宿主因子CD63的相互作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法構(gòu)建CD63沉默表達(dá)質(zhì)粒sh RNA-4038、sh RNA-4041和過表達(dá)質(zhì)粒pc DNA3.1（+）-CD63-flag（CD63-Flag）。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染輪狀病毒2種宿主細(xì)胞CV-1和MA104,采用實時定量PCR（RT-qPCR）和western blot檢測CD63 mRNA和蛋白的表達(dá),篩選CD63高表達(dá)細(xì)胞株（CD63-H）和低表達(dá)細(xì)胞株（CD63-L）。輪狀病毒SA11感染CD63-L、CD63-H、正常對照細(xì)胞組（CNr）及空白對照細(xì)胞組（shNC）,采用RT-qPCR、western blot檢測病毒基因拷貝數(shù)和病毒蛋白表達(dá)。結(jié)果細(xì)胞轉(zhuǎn)染sh RNA-4038和sh RNA-4041質(zhì)粒后,CD63的表達(dá)明顯抑制,其中CV-1細(xì)胞mRNA和蛋白水平抑制效率分別為69.7%和39.8%,MA104細(xì)胞mRNA和蛋白水平抑制效率分別為76.4%和49.3%;CD63-H組細(xì)胞內(nèi)CD63的mRNA和蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.05）。采用滴度... 

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

輪狀病毒蛋白相對表達(dá)量

實時熒光定量檢測MA104細(xì)胞和CV-1細(xì)胞中CD63基因m RNA表達(dá)

RV實時熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雌激素受體ER、GPR30在宮頸癌及癌前病變的表達(dá)及相關(guān)性研究[J]. 劉欣欣,舒麗莎,張凡.  現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué). 2019(17)
[2]2015-2017年湖北省口服輪狀病毒減毒活疫苗安全性監(jiān)測分析[J]. 陳燕飛,汪立先,王雷.  現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué). 2019(02)
[3]金屬基質(zhì)蛋白酶-2基因多態(tài)性與病毒性腦膜炎的易感性關(guān)系[J]. 江毅卿,王鳳,周靈芳,劉素芝.  現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué). 2017(06)



本文編號：3676146