【背景】銅綠假單胞菌PAO1中存在與環(huán)鳥苷二磷酸（cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP）代謝相關(guān)基因PA0575。【目的】探討銅綠假單胞菌PAO1中環(huán)鳥苷二磷酸代謝相關(guān)基因PA0575對(duì)運(yùn)動(dòng)能力及生物膜的影響�！痉椒ā客ㄟ^(guò)PCR對(duì)菌株遺傳背景進(jìn)行確認(rèn);利用剛果紅結(jié)合實(shí)驗(yàn)及電轉(zhuǎn)PcdrA-gfp質(zhì)粒間接測(cè)量胞內(nèi)c-di-GMP水平;利用泳動(dòng)性（swimming）、蜂群泳動(dòng)（swarming）、蹭行運(yùn)動(dòng)（twiching）和生物膜定量實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行表型分析,并在運(yùn)動(dòng)培養(yǎng)基中添加抗生素研究其對(duì)運(yùn)動(dòng)能力的影響;針對(duì)PA0575基因進(jìn)行融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建,并對(duì)蛋白進(jìn)行原核誘導(dǎo)表達(dá)�！窘Y(jié)果】3株突變體菌株的轉(zhuǎn)座子插入突變位點(diǎn)不一致,胞內(nèi)c-di-GMP水平檢測(cè)結(jié)果顯示,PA0575-1菌株的c-di-GMP含量高于野生型PAO1菌株（P<0.05）,PA0575-2、PA0575-3菌株胞內(nèi)c-di-GMP水平與野生型PAO1菌株無(wú)差異（P>0.05）。運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中,與野生型PAO1菌株相比,PA0575-1菌株泳動(dòng)性增強(qiáng)（P&... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑和儀器及培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 c-di-GMP水平檢測(cè)
        1.2.2 生物膜定量實(shí)驗(yàn)及運(yùn)動(dòng)能力的表型分析
        1.2.3 表達(dá)載體的構(gòu)建與蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果與分析
    2.1 PCR轉(zhuǎn)座子突變驗(yàn)證
    2.2 細(xì)菌中c-di-GMP水平的檢測(cè)
    2.3 細(xì)菌運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)及抗生素對(duì)運(yùn)動(dòng)能力的影響
    2.4 生物膜檢測(cè)
    2.5 PA0575基因的8個(gè)異源表達(dá)載體的構(gòu)建及誘導(dǎo)表達(dá)
3 討論與結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]L1.LtrB內(nèi)含子編碼蛋白反轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域關(guān)鍵催化位點(diǎn)分析及功能驗(yàn)證[J]. 陳相好,張崢嶸,劉芳,陳崢宏,洪偉,綦廷娜,谷俊瑩,崔古貞.  微生物學(xué)報(bào). 2019(12)



本文編號(hào)：3661815