生殖支原體（Mycoplasma genitalium,Mg）是介于病毒與細(xì)菌之間、缺乏細(xì)胞壁、呈高度多型性,可在無生命培養(yǎng)基中繁殖的原核細(xì)胞型微生物,可引起泌尿生殖系統(tǒng)感染,被歸類于性傳播疾病病原體之一。近年來,Mg感染率呈現(xiàn)上升趨勢,但目前仍然沒有滿足臨床需要的藥物和疫苗可供使用。Mg最關(guān)鍵的外膜粘附蛋白為生殖支原體粘附素蛋白（Mg Pa）,其C端具有較強(qiáng)的免疫原性,自發(fā)性的無細(xì)胞黏附活性的Mg突變株則缺乏Mg Pa,因此,Mg Pa在Mg的致病性方面起著至關(guān)重要的作用。本研究利用構(gòu)建好的原核表達(dá)載體PET-30a（+）/Mg Pa在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)Mg Pa的重組蛋白（r Mg Pa）,采用噬菌體展示隨機(jī)肽庫技術(shù)篩選Mg Pa重組蛋白的特異性結(jié)合多肽,并對篩選到的特異性多肽進(jìn)行鑒定。本研究目的:1、利用課題組前期構(gòu)建好的含生殖支原體粘附素蛋白（Mg Pa）優(yōu)勢表位（1 075¹ 364 aa）的重組載體,表達(dá)并純化Mg Pa,為研究Mg Pa的生物學(xué)功能奠定前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。2、利用噬菌體展示隨機(jī)肽庫篩選并鑒定Mg Pa的特異性結(jié)合多肽,為研究Mg Pa的致病... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

IPTG不同誘導(dǎo)濃度對pET-30a(+)/MgPa表達(dá)的影響

同一 IPTG 誘導(dǎo)劑量 1.5mmol/L，不同誘進(jìn)行條件摸索，進(jìn)行 SDS-PAGE 分析（圖 2.2）顯示：表達(dá)量增多，而蛋白量達(dá)到高峰的誘導(dǎo)時(shí)間為 4h 時(shí)。M 1 2 3 4 5 6 7 8

圖 2.3 誘導(dǎo)溫度的不同對 pET-30a(+)/MgPa 表達(dá)的影響準(zhǔn)品；1：37℃誘導(dǎo) pET-30a(+)/MgPa 的沉淀；2：37℃誘導(dǎo) pET-30a(+：30℃誘導(dǎo) pET-30a(+)/MgPa 的沉淀；4：30℃誘導(dǎo) pET-30a(+)/MgPa 的導(dǎo) pET-30a(+)/MgPa 的沉淀；6：27℃誘導(dǎo) pET-30a(+)/MgPa 的上清。

【參考文獻(xiàn)】：
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