通過觀察miR-125b-5p對分枝桿菌在宿主細(xì)胞和小鼠體內(nèi)存活情況的影響,探究其在抗結(jié)核免疫過程中的作用。采用不同培養(yǎng)基對分枝桿菌進行培養(yǎng)并計數(shù);以1640培養(yǎng)基加10%胎牛血清培養(yǎng)所有實驗用細(xì)胞。將終濃度50 nmol/L的miR-125b-5p模擬物、miR-125b-5p抑制劑及磷酸鹽緩沖液（PBS）對照加入細(xì)胞后,在不同時間點收集細(xì)胞。用分枝桿菌分別感染宿主細(xì)胞（A549、THP-1和RAW264.7）以及C57BL/6小鼠。采用定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測miR-125b-5p的表達量。結(jié)果miR-125b-5p在分枝桿菌感染的多種宿主細(xì)胞及小鼠中都顯著上調(diào)表達,其中小鼠肺部的表達量提高了約15倍。分別轉(zhuǎn)染模擬物和抑制劑后,再用分枝桿菌感染細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-125b-5p可促進分枝桿菌在宿主細(xì)胞內(nèi)的生長。當(dāng)miR-125b-5p抑制劑注射到卡介苗（BCG）感染的小鼠體內(nèi)時,小鼠體內(nèi)的細(xì)菌載量顯著降低（P<0.05）。本研究證明miR-125b-5p可調(diào)控分枝桿菌在宿主細(xì)胞及小鼠體內(nèi)的生長,在抗結(jié)核免疫過程中發(fā)揮了重要作用。進一步對其作用機制的深入研究將為臨床結(jié)核病的治療提... 

【文章來源】：微生物與感染. 2020,15(02)

【文章頁數(shù)】：6 頁

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圖1 分枝桿菌感染不同類型的細(xì)胞誘導(dǎo)了細(xì)胞內(nèi)miR-125b-5p的上調(diào)表達

用BCG感染吞噬細(xì)胞后,再轉(zhuǎn)染miR-125b-5p抑制劑來減低細(xì)胞內(nèi)miR-125b-5p的表達量。菌落計數(shù)的結(jié)果表明,在被抑制劑轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞中,BCG菌落數(shù)目約是對照組的50%(圖3B,左圖)。同樣,在被抑制劑轉(zhuǎn)染的巨噬細(xì)胞THP-1和RAW264.7中,BCG的菌落數(shù)目都比對照組顯著降低(圖3B,中、右圖)。結(jié)果說明,在轉(zhuǎn)染miR-125b-5p抑制劑后,分枝桿菌在細(xì)胞內(nèi)的生長數(shù)目減少。表明miR-125b-5p的表達能夠促進分枝桿菌在細(xì)胞內(nèi)的生長。圖3 miR-125b-5p及其抑制劑對細(xì)胞內(nèi)感染的BCG生長的影響

圖2 miR-125b-5p在BCG感染的C57BL/6小鼠肺部的表達水平顯著高于對照組2.3 miR-125b-5p抑制劑減低分枝桿菌感染小鼠體內(nèi)的細(xì)菌載量

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3562591