在抗結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染機(jī)體的過程中,肺臟上皮細(xì)胞（Lung epithelial cells,AEC）是肺臟抵抗感染的第一道“物理屏障”。AEC作為MTB最先侵染的靶細(xì)胞之一,通過分泌細(xì)胞因子,可以招募肺泡巨噬細(xì)胞（Alveolarmacrophage,AMs）到肺泡中,在抗MTB感染的先天免疫中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),在癌癥的發(fā)生過程中Hedgehog（Hh）信號(hào)通路同p53和NF-κB信號(hào)通路存在著“cross-talκ”關(guān)系,并調(diào)控著機(jī)體的炎癥反應(yīng)。這就提示我們?cè)贛TB感染宿主肺臟時(shí),肺臟上皮細(xì)胞與肺泡巨噬細(xì)胞中Shh、p53和NF-κB信號(hào)通路可能會(huì)被活化,并參與調(diào)控炎性細(xì)胞因子的分泌等來(lái)抵御MTB的感染!本研究利用牛結(jié)核分枝桿菌減毒株（Bacillus Calmette-Guerin,BCG）感染Shh干擾/過表達(dá)的小鼠肺臟上皮細(xì)胞TC-1,收集細(xì)胞上清液并添加到巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞,分析肺泡巨噬細(xì)胞中p53與NF-κB信號(hào)通路相關(guān)信號(hào)分子的變化以及炎性細(xì)胞因子的分泌情況,并建立小鼠BCG腹腔... 

【文章來(lái)源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１肺泡上皮細(xì)胞與肺泡巨噬細(xì)胞Ｍ??Ｆｉｇｕｒｅｌ－１?ａｌｖｅｏｌａｒ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ?ａｌｖｅｏｌａｒ?ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｌ３４Ｊ??

１．６?Ｓｈｈ／ｐ５３／ＮＦ－ＫＢ信號(hào)通路在抗結(jié)核感染中的免疫調(diào)控作用??Ｓｈｈ信號(hào)通路主要在調(diào)控人體的發(fā)育方面具有調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)的作用．而ｐ５３信號(hào)通路能夠?qū)?xì)胞周期進(jìn)行調(diào)控進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的凋亡，因此兩個(gè)信號(hào)通路之間可能存在著緊密的系■＝在ＲｅｅｍＭａｌｅｋ的研究說(shuō)明了這一點(diǎn)，小腦顆粒神經(jīng)元前體（ＧＮＰ）被破壞后會(huì)導(dǎo)致機(jī)運(yùn)動(dòng)與學(xué)習(xí)能力的缺陷，他們利用Ｍｄｍ２的一個(gè)等位基因〔Ｍｄｍ２ｐｕｒｏ）編碼ｐ５３關(guān)鍵負(fù)調(diào)控??因子ＭＤＭ２從而改變機(jī)體內(nèi)ｐ５３和ＭＤＭ２的表達(dá)，他們?cè)诳s小的小鼠小腦葉片中調(diào)低ＭＤＭ２??的表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，Ｓｈｈ表達(dá)量顯著下調(diào)，Ｓｈｈ信號(hào)通路下游Ｇｌｉｌ和Ｇｌｉ２表達(dá)量也顯著降低，同時(shí)??Ｓｈｈ會(huì)刺激ＧＮＰ．促進(jìn)ＭＤＭ２積累并增強(qiáng)絲氨酸１６６的磷酸化．總而言之在ＧＮＰ中，ＭＤＭ２是??ｐ５３和Ｓｈｈ信號(hào)通路間聯(lián)系的紐帶［７１］。??近年來(lái)的研究表明，Ｓｈｈ信號(hào)通路在炎癥反應(yīng)中起到關(guān)鍵作用，而在人體的炎癥反應(yīng)中??ＮＦ－ｋＢ起到關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，因此兩種信號(hào)通路也存在著一定的聯(lián)系。目前尚不清楚細(xì)胞內(nèi)??是如何利用Ｃｉ／Ｇｌｉ激劑和阻遏物的組合產(chǎn)生特定的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，但已經(jīng)鑒定了許多共激活劑??（包括ＣＢＰ，介體和Ｈｏｘｄｌ２）和共抑制劑（例如Ｓａｐｌ８，?ｍＳｉｎ３ａ和Ｓｋｉ）?［７２］。在Ｈｐ感染引起的??假性幽門化過程中ＮＦ－ｋＢ能夠激活Ｓｈｈ信號(hào)通路并激活，實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)在病變組織周圍觀察??至ｊＪｂｃｌ－２，?Ｇｌｉ－１和ＰＴＣＨ表達(dá)量上調(diào)［７３］。ＮＦ－ｋＢ和ＩＬ－８是Ｓｌｉｌｉ的兩個(gè)轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)，己經(jīng)有實(shí)驗(yàn)表明??ＮＦ－ｋＢ，ｈｈＮＦ－ｋＢｔ７４］。??

抗兔丨ｇＧ－ＨＲＰ?羊?中山金橋?ＺＢ－２３０】?１：１０００??２．１．６慢病毒表達(dá)載體??慢病毒購(gòu)買于吉?jiǎng)P公司，表達(dá)載體見表２－５，慢病毒骨架見圖２－１。??表２－５?Ｓｈｈ慢病毒載體??Ｔａｂｌｅ?２－５?Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｌｅｎｌｉｖｉｒｕｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ??名稱??滴度／濃度???Ｓｈｈ?過表達(dá)載體?ＬＶ－Ｓｈｈ（４０７８７－ｌ）?２Ｅ＋８ＴＵ／ｍｌ??Ｓｈｈ?抑制載體?ＬＶ－Ｓｈｈ－ＲＮＡｉ（６３１?丨丨－１）〗Ｅ＋９ＴＵ／ｍｌ??Ｓｈｈ?抑制載體?ＬＶ－Ｓｈｈ－ＲＮＡｉ（６３ｎ〇－Ｉ）?ｌＥ＋９ＴＵ／ｍｌ??Ｓｈｈ?抑制載體?ＬＶ－Ｓｈｈ－ＲＮＡｉ（６３１１２－丨）８Ｅ＋８ＴＵ／ｍｌ??Ｓｈｈ陰性對(duì)照病毒?ＣＯＮ３１３?８Ｅ＋８ＴＵ／ｍｌ??Ｉ?－?＼??圖２－１?Ｓｈｈ干擾慢病毒骨架載體圖譜?圖２－２?Ｓｈｈ過表達(dá)慢病毒骨架載體圖譜??Ｆｉｇ．２－１?Ｓｈｈ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｓ?ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋａｇｉｎｇ?ｐｌａｓｍｉｄ?Ｆｉｇ．２－２?Ｓｈｈ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋａｇｉｎｇ?ｐｌａｓｍｉｄ??２．２實(shí)驗(yàn)方法??２．２．１?ＴＣ－１細(xì)胞培養(yǎng)??收到細(xì)胞后，取出裝有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。??ａ）如果細(xì)胞未超過８０％密度時(shí)，用７５％酒精噴灑整個(gè)瓶身消毒后放入超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)??格進(jìn)行無(wú)菌操作

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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