目的:核糖體對于每個(gè)細(xì)胞中的蛋白質(zhì)合成來說都是必不可少的。研究表明將細(xì)胞增殖與核糖體生物發(fā)生聯(lián)系起來的核仁蛋白是潛在的致癌基因,人的SURF6蛋白是進(jìn)化保守核仁蛋白中的一種,具有未知的功能,針對該蛋白的研究可能為腫瘤治療提供新的思路。研究證實(shí),在腫瘤細(xì)胞中SURF6基因高表達(dá),這種高表達(dá)可能為腫瘤提供核糖體原料來實(shí)現(xiàn)其高蛋白表達(dá),但具體參與機(jī)制仍然不清楚。因?yàn)樵诹阎辰湍钢羞M(jìn)行分子生物學(xué)操作簡便、快捷,同時(shí)rrp14基因編碼的蛋白與人SURF6蛋白氨基端高度同源,所以本實(shí)驗(yàn)選擇裂殖酵母作為研究對象來研究蛋白的功能。在裂殖酵母中,SURF6基因分割為rrp14及rrp1402兩個(gè)不同的基因,它們編碼的蛋白分別對應(yīng)于SURF6的N端及C端,這為我們單獨(dú)研究SURF6的N端提供了天然的模式生物。本實(shí)驗(yàn)中,我們將研究rrp14基因?qū)Φ鞍椎暮巳兽D(zhuǎn)運(yùn)以及核糖體RNA的影響。方法:運(yùn)用基因同源重組的方法制備rrp14基因敲除的酵母,觀察酵母生長狀況。運(yùn)用質(zhì)譜、免疫共沉淀、免疫熒光顯微鏡等方法研究酵母中原位標(biāo)記的Rrp14蛋白以及Pol5蛋白之間的關(guān)系。運(yùn)用分子克隆的方法構(gòu)建所需質(zhì)粒后轉(zhuǎn)入酵母中,通過P... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

rrp14敲除在酵母細(xì)胞生長上的影響

圖 3.2 Rrp14 蛋白與 Pol5 蛋白物理間相互作用質(zhì)譜分析結(jié)果 B 免疫共沉淀分析 Rrp14 與 Pol5 蛋白物理間相C 熒光顯微鏡觀察蛋白在細(xì)胞中的位置 比例尺=1μm我們已經(jīng)證實(shí) Rrp14 蛋白在酵母的生長過程中起到重要作用，rp14 功能，我們在基因組對 Rrp14 蛋白的 C 端進(jìn)行了原位 GF 磁珠對 Rrp14 蛋白及其結(jié)合蛋白進(jìn)行了純化，通過質(zhì)譜檢測列與 Rrp14 潛在的物理間相互作用蛋白。在這其中，我們首次4 存在潛在互作關(guān)系（見圖 3.2.A）。由于目前已經(jīng)知道，Pol5 錄因子，而 Rrp14 參與 rRNA 轉(zhuǎn)錄，但具體機(jī)制仍然不清，我我們，Rrp14 很有可能通過與 Pol5 相互作用進(jìn)而調(diào)控 rRNA 的疫共沉淀技術(shù)來確證此二種蛋白的物理間相互作用關(guān)系。我們

說明 rrp14Δ、Rrp14-Δ(7-12)會(huì)導(dǎo)致 RNA 的總量下降（見圖3.5.A）。隨后通過實(shí)時(shí)定量 PCR 觀察核糖體 RNA 表達(dá)，發(fā)現(xiàn) rrp14Δ、Rrp14-Δ（7-12）酵母的 mRNA 中 28s、18s、ITS1 的表達(dá)要比野生型酵母的表達(dá)量低（*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001）（見圖 3.5.B）。上述結(jié)果表明，當(dāng) Pol5 蛋白不與 Rrp14 蛋白互作時(shí)，該酵母的核糖體相關(guān)的 mRNA 表達(dá)水平下降，也就說明了 Rrp14 蛋白是通過 Pol5 蛋白影響核糖體RNA 的轉(zhuǎn)錄。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]核糖體蛋白基因及其與人類疾病的研究進(jìn)展[J]. 楊帆,劉衛(wèi)平.  臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2005(03)

博士論文
[1]酵母核糖體大亞基組裝過程的研究[D]. 馬成英.清華大學(xué) 2017



本文編號：3510200